1237- Tuberculosis: pruebas de sensibilidad fenotipicas y genotipicas

Kizil A Yusoof , Juan Ignacio García , Alyssa Schami, Andreu Garcia-Vilanova, Holden V Kelley, Shu-Hua Wang, Adrian Rendon, Blanca I Restrepo, Marcel Yotebieng, Jordi B Torrelles. Pruebas de sensibilidad fenotípica y genotípica a fármacos e inmunodiagnóstico para la tuberculosis: una revisión. Front Immunol. 2022 Jul 7;13:870768.  Graduate School of Biomedical Sciences, University of Texas Health San Antonio, San Antonio, TX, United States.

Resumen

La tuberculosis (TB), considerada una enfermedad antigua, sigue matando a una persona cada 21 segundos. El diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis (M.tb) aún presenta muchos desafíos, especialmente en países de ingresos bajos y medianos con altas tasas de carga de enfermedad. En las últimas dos décadas, la cantidad de casos de TB resistente a los medicamentos (DR) ha ido en aumento, desde monorresistente (principalmente por resistencia a la isoniazida o rifampicina) hasta TB extremadamente resistente a los medicamentos. La DR-TB es problemática de diagnosticar y tratar, y por lo tanto, necesita más recursos para controlarla. Junto con los síntomas clínicos de la TB+, el diagnóstico fenotípico y genotípico de la TB incluye una serie de pruebas que se pueden utilizar en diferentes muestras para determinar si una persona tiene TB, así como si la cepa de M.tb + que causa la enfermedad es sensible o resistente a los medicamentos. Aquí, revisamos y discutimos las ventajas y desventajas del fenotípico vs. pruebas de susceptibilidad genotípica a medicamentos para la tuberculosis resistente a los medicamentos (DR-TB), avances en el inmunodiagnóstico de la tuberculosis y proponen un llamado para mejorar las pruebas de diagnóstico de la tuberculosis fáciles de implementar y de bajo costo para controlar la carga de la tuberculosis resistente a los medicamentos (DR-TB), especialmente a la luz del aumento de la carga mundial de resistencia bacteriana a los antimicrobianos y el impacto potencialmente a largo plazo de la interrupción de la enfermedad por el coronavirus 2019 (COVID-19) en los programas de tuberculosis.

Introducción

La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que en los próximos 35 años, sin una vigilancia y un diagnóstico adecuados, aproximadamente 75 millones de personas sufrirán tuberculosis (TB) resistente a los medicamentos (DR), lo que le costará a la economía mundial 16,7 billones de dólares. Estas cifras pueden ser insuficientes debido al impacto negativo proyectado de la pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) en el control de la TB. 

Durante décadas, la OMS se ha basado en un enfoque simplificado y pragmático que ofrece regímenes farmacológicos estandarizados para todos para tratar la TB. Sin embargo, el control y la gestión de la creciente carga de DR-TB requieren acceso universal a pruebas de sensibilidad a medicamentos (DST) y enfoques de tratamiento individualizados.

Actualmente, en países con alta carga de TB, existen opciones de diagnóstico limitadas para realizar pruebas de DR-TB. Pruebas como los tubos indicadores de crecimiento de micobacterias BACTEC™ (MGIT), Xpert o Xpert Ultra ® MTB/RIF, Truenat MTB/MTB Plus/MTB-RIF DX y los ensayos de sonda lineal (LPA), si bien proporcionan resultados para la TB-DR, son costosas y requieren equipos complejos, infraestructuras de laboratorio, necesidades de bioseguridad y capacitación para los técnicos de laboratorio. 

Estos hechos limitan su implementación en entornos de punto de atención (POC) en comunidades de bajos recursos, donde los casos de TB-DR están aumentando, especialmente debido al impacto de la pandemia de COVID-19 que limita las pruebas y el tratamiento de la TB-DR (falta de suministros de medicamentos) y personal dedicado.  Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar mejores pruebas de diagnóstico en el POC para el diagnóstico rápido de la TB-DR y el monitoreo del tratamiento.

A pesar del progreso sustancial en el control general de la tuberculosis, que resultó en una disminución del 47% en la mortalidad por tuberculosis entre 1990 y 2015, la tuberculosis sigue siendo una de las enfermedades infecciosas asociadas con una alta mortalidad. La aparición de varios perfiles de TB-DR en los últimos 30 años ha complicado aún más el uso de regímenes de tratamiento farmacológico estandarizados. Incluso antes de la COVID-19, las estimaciones indicaban que la TB-DR sería responsable de más muertes por resistencia a los antimicrobianos que cualquier otro patógeno. Para frenar la carga de la TB-DR, será necesario acceder a pruebas de sensibilidad a medicamentos de alta calidad que permitan fundamentar y guiar los regímenes individualizados para cada paciente con TB, especialmente en entornos con alta carga y bajos recursos. 

En este artículo, revisamos el panorama diagnóstico actual de la TB-DR, incluyendo los que se encuentran en desarrollo, para evaluar su idoneidad y sostenibilidad para el control de la TB-DR con base en regímenes individualizados. Cabe destacar que exploramos la posibilidad de aplicar pruebas serológicas conocidas para la TB activa, así como para determinar si un paciente determinado responde al tratamiento. También se analiza la necesidad de biomarcadores específicos de M.tb y/o del huésped para diferenciar la TB-DR de la TB-DR mediante una simple prueba en el punto de atención.

1)  Leer el articulo completo 

2)  Recomendaciones OMS sobre tratamiento para la tuberculosis

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina

 

1236- Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana fenotípicas de próxima generación

Grace Reszetnik, Keely Hammond , Sara Mahshid, Tamer AbdElFatah, Dao Nguyen, Rachel Corsini, Chelsea Caya, Jesse Papenburg, Matthew P Cheng, Cedric P Yansouni . Pruebas rápidas de susceptibilidad antimicrobiana fenotípica de próxima generación. Nature Communication. 2024;15: 9719. Department of Bioengineering, Faculty of Engineering, McGill University, Montreal, Quebec Canada. Temerty Faculty of Medicine, University of Toronto, Toronto, Ontario Canada

Resumen 

El lento progreso hacia la implementación de la bacteriología clínica convencional en entornos de bajos recursos y el gran interés en una mayor velocidad en las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST) en general han centrado la atención en las tecnologías de AST rápidas de próxima generación. En esta revisión, sintetizamos sistemáticamente publicaciones y presentaciones a agencias reguladoras que describen tecnologías que proporcionan AST fenotípica con mayor rapidez que los métodos convencionales. Caracterizamos más de noventa tecnologías en términos de innovaciones técnicas subyacentes, nivel de madurez tecnológica, grado de validación clínica y tiempo de obtención de resultados. Este trabajo proporciona una guía para que los desarrolladores de tecnología y los microbiólogos clínicos comprendan el panorama tecnológico de AST fenotípica rápida, la línea de desarrollo actual y los hitos de validación específicos de AST.

Introducción

El acceso inadecuado a pruebas bacteriológicas clínicas en entornos de bajos recursos (LRS) impide el manejo de pacientes individuales, la detección de resistencia a los antimicrobianos (AMR) y la implementación de intervenciones efectivas de administración de antimicrobianos (AMS). Esto alimenta el uso excesivo de antimicrobianos empíricos que impulsan la AMR, ahora una de las mayores amenazas que enfrenta la humanidad.

La AMR afecta desproporcionadamente a los países de bajos ingresos, en particular aquellos en África subsahariana y el sur de Asia . Desafortunadamente, solo el 1.3% de los 50,000 laboratorios médicos en 14 países subsaharianos ofrecían alguna prueba bacteriológica clínica a partir de 2019, debido a múltiples factores que frustran la ampliación de la bacteriología convencional . Estos incluyen un requisito de infraestructura especializada, una falta de automatización y un acceso local inadecuado a una cadena de suministro compleja que se ve agravada por distorsiones cambiarias en muchos países. 

Los sectores de diagnóstico centrados en enfermedades específicas como el VIH, la tuberculosis, la malaria o la COVID-19 requieren una lista comparativamente corta de plataformas o suministros. Por el contrario, los laboratorios de bacteriología clínica (BCC) requieren una cadena de suministro compleja, que puede involucrar cientos de componentes de origen estable y calidad garantizada. Aunque suelen ser económicos, a menudo no están disponibles en los LRS o no pueden adquirirse sin divisas, que a menudo son inaccesibles. Las dificultades en materia de recursos humanos y la relativa falta de orientación granular complican aún más la implementación de los BCC.

La piedra angular de los laboratorios de bacteriología clínica es el diagnóstico de infecciones del torrente sanguíneo . Esto implica convencionalmente tres procesos secuenciales: i) detección del crecimiento bacteriano, ii) identificación taxonómica de colonias bacterianas aisladas y iii) pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST). 

La detección del crecimiento bacteriano en frascos de hemocultivo puede tardar hasta 5 días, pero a menudo ocurre dentro de las primeras 24 h de incubación . A continuación, la identificación bacteriana suele tardar otras 24 h. Finalmente, la AST en colonias bacterianas puras normalmente también requiere de 4 a 24 h. 

Se han propuesto pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) para acelerar este proceso. Por desgracia, la mayoría de los métodos genotípicos se basan actualmente en la detección de un número limitado de objetivos de una manera que no está libre de hipótesis ni permite la detección de los diversos mecanismos de RAM en entornos clínicos. Por ejemplo, un gen de carbapenemasa es identificable en menos del 50 % de las bacterias que se encuentran fenotípicamente resistentes a los carbapenémicos. Por lo tanto, a pesar de las considerables contribuciones del diagnóstico basado en NAAT en los campos de la tuberculosis, el VIH y la malaria, hasta la fecha han surgido pocas tecnologías disponibles que sustituyan adecuadamente a la bacteriología convencional para obtener una AST rápida y precisa. 

La falta de progreso en la implementación de la bacteriología clínica convencional en entornos de bajos recursos, así como el interés en una mayor velocidad y precisión para la AST en general, ha desviado la atención hacia las tecnologías de AST rápidas de nueva generación.

En esta revisión, nuestro objetivo fue comprender la cartera actual de tecnologías de AST y su papel para reducir la brecha diagnóstica que enfrenta actualmente el LRS. Realizamos una revisión exhaustiva de publicaciones científicas y presentaciones a agencias reguladoras que describen tecnologías capaces de proporcionar AST fenotípica en un plazo más corto que los métodos convencionales. Posteriormente, caracterizamos la cartera de tecnologías de AST identificadas en términos de sus innovaciones técnicas subyacentes, nivel de madurez tecnológica (TRL), grado de validación clínica y tiempo esperado estandarizado para obtener resultados desde la recolección de muestras.

Tecnologías identificadas y marcos comparativos

Número de plataformas identificadas

Se identificaron 81 publicaciones que describen plataformas de AST no comercializadas (67 fenotípicas y 14 basadas en ácidos nucleicos ). También se identificaron 18 plataformas comercializadas: 12 de 18 con autorización 510 (k) de la FDA y marcado CE, y 6 de 18 con marcado CE únicamente. Se describieron ocho plataformas comercializadas en 34 publicaciones, antes o después de su comercialización. Se identificaron nueve tecnologías de forma externa a nuestra búsqueda bibliográfica en PubMed y las bases de datos de la FDA mediante consultas con expertos y búsquedas en internet (diagrama PRISMA, Fig.1)....

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1235- Recomendaciones CDC/ 2024 para las pruebas de sífilis.

John R. Papp, Ina U. Park, Yetunde Fakile, Lara Pereira, Allan Pillay, Gail A. Bolan. Recomendaciones del laboratorio CDC para las pruebas de sífilis en USA, 2024. Recomendaciones e informes / 8 de febrero de 2024 / 73(1);1–32.  Division of STD Prevention, National Center for HIV, Viral Hepatitis, STD, and TB Prevention, CDC, Atlanta, Georgia; University of California San Francisco, San Francisco, California; 3The Task Force for Global Health, Decatur, Georgia

Resumen

Este informe proporciona nuevas recomendaciones de los CDC para las pruebas que pueden respaldar el diagnóstico de sífilis, incluidas las pruebas serológicas y los métodos para la identificación del agente causal Treponema pallidum . Estas recomendaciones integrales son las primeras publicadas por los CDC sobre las pruebas de laboratorio para la sífilis, que tradicionalmente se han basado en algoritmos serológicos para detectar una respuesta inmune humoral a T. pallidum . Estas pruebas se pueden dividir en pruebas no treponémicas y treponémicas dependiendo de si detectan anticuerpos que son ampliamente reactivos a los antígenos lipoidales compartidos por el huésped y T. pallidum o anticuerpos específicos de T. pallidum , respectivamente. Ambos tipos de pruebas se deben usar en conjunto para ayudar a distinguir entre una infección no tratada o una infección pasada que se ha tratado con éxito. Las pruebas serológicas más nuevas permiten la automatización del laboratorio, pero se deben usar en un algoritmo, que también puede involucrar pruebas serológicas manuales más antiguas. La detección directa de T. pallidum continúa evolucionando desde el examen microscópico del material de las lesiones para la visualización de T. pallidum hasta la detección molecular del organismo. En Estados Unidos, la disponibilidad de pruebas de diagnóstico rápido para la sífilis es limitada; una mayor disponibilidad de pruebas de diagnóstico rápido sensibles y específicas podría facilitar la expansión de los programas de cribado y reducir el tiempo transcurrido entre el resultado de la prueba y el tratamiento. Estas recomendaciones están dirigidas a directores de laboratorios clínicos, personal de laboratorio, médicos clínicos y personal de control de enfermedades, quienes deben elegir entre los múltiples métodos de prueba disponibles, establecer procedimientos operativos estándar para la recolección y el procesamiento de muestras, interpretar los resultados de las pruebas para su informe de laboratorio, y asesorar y tratar a los pacientes. Las futuras revisiones de estas recomendaciones se basarán en nuevas investigaciones o avances tecnológicos en el campo de la sífilis en el laboratorio clínico.

Introducción

Treponema pallidum subsp. pallidum, que se transmite principalmente por contacto sexual, se encuentra entre las cuatro especies patógenas del género Treponema, que pertenece a la familia Treponemataceae. Las otras tres especies patógenas de Treponema causan enfermedades cutáneas que se transmiten principalmente por contacto directo de piel a piel. El pian es causado por T. pallidum subsp. pertenue y se encuentra en zonas tropicales de África, Asia y Latinoamérica. La infección por Treponema carateum produce pinta que, aunque es poco frecuente, se encuentra en zonas tropicales de Latinoamérica. La sífilis endémica o bejel, causada por T. pallidum subsp. endemicum , afecta principalmente a niños y se encuentra principalmente en el Mediterráneo oriental, África occidental y Cuba. Sin embargo, el análisis filogenético de muestras de lesiones de ciertos pacientes fuera de las zonas donde el bejel es endémico y que habían recibido un diagnóstico de sífilis reveló que era T. pallidum subsp. El virus endemicum podría transmitirse por vía sexual. Estos pacientes presentan una evolución clínica similar a la sífilis. En este informe, T. pallidum subsp. pallidum se abreviará como T. pallidum, a menos que sea necesaria una mayor distinción entre las subespecies.

T. pallidum causa una infección sistémica y puede llevar a secuelas graves en múltiples sistemas de órganos, incluyendo el sistema nervioso central (SNC) y los sistemas ocular y ótico. La transmisión vertical puede causar sífilis congénita, que puede resultar en abortos espontáneos, abortos espontáneos o muerte fetal; los bebés con sífilis congénita pueden tener signos clínicos de infección al nacer o meses o años después del nacimiento. 

Las características clínicas en adultos progresan a través de diferentes etapas comenzando con la sífilis primaria, que a menudo aparece alrededor de 3 semanas después de la exposición, con un período de incubación de 10 a 90 días. La sífilis primaria se caracteriza por lesiones ulcerativas únicas o múltiples (chancros) que a menudo son indoloras y por lo tanto pueden pasar desapercibidas cuando ocurren dentro de la boca, la vagina o el recto. Los chancros pueden persistir durante 2 a 6 semanas antes de sanar espontáneamente. La sífilis secundaria suele comenzar de 2 a 24 semanas después de que cicatrizan la mayoría de las lesiones primarias y se caracteriza comúnmente por una erupción mucocutánea que aparece en el tronco, las palmas de las manos y las plantas de los pies; en aproximadamente una cuarta parte de los pacientes se presentan manchas mucosas en la boca o condilomas planos en los genitales o el recto. 

Los síntomas de la sífilis primaria y secundaria pueden ocurrir simultáneamente, lo cual es más probable en personas con infección por VIH. Las lesiones húmedas de la sífilis primaria y secundaria contienen T. pallidum infeccioso que puede transmitirse por contacto sexual a personas susceptibles. Las manifestaciones clínicas secundarias también pueden consistir en linfadenopatía, alopecia y, ocasionalmente, manifestaciones neurológicas y oculares. Los signos y síntomas de la sífilis secundaria suelen resolverse en aproximadamente 3 meses, con un rango de 1 a 12 meses, pero pueden reaparecer periódicamente durante los primeros años de infección en ≤25 % de las personas no tratadas.

El intervalo entre la sífilis primaria a secundaria y secundaria a terciaria se conoce como latencia cuando no hay síntomas o signos de sífilis presentes. El intervalo de la sífilis secundaria a la terciaria puede durar años o décadas antes de que aparezcan los síntomas. En hasta dos tercios de los pacientes, la enfermedad puede permanecer latente de por vida y nunca progresar a sífilis terciaria. La sífilis latente asintomática se divide en tres categorías: infecciones latentes tempranas que se cree que se adquirieron en el último año; infecciones latentes tardías que se cree que tienen una duración mayor a 1 año; y sífilis latente de duración desconocida en la que el momento de la adquisición no se puede determinar con base en los datos clínicos, históricos o de laboratorio disponibles. 

Los signos clínicos de la sífilis terciaria, una afección poco común, incluyen sífilis cardiovascular, con aneurismas o estenosis resultantes de la multiplicación de espiroquetas treponémicas en la aorta torácica o las arterias coronarias; Gomas sifilíticos, con crecimientos granulomatosos blandos que pueden causar destrucción tisular en cualquier sistema orgánico, incluyendo huesos y cartílagos; y neurosífilis, con manifestaciones neurológicas tardías, como tabes dorsal y paresia generalizada. La neurosífilis puede presentarse en cualquier etapa de la sífilis y puede ser asintomática o sintomática durante cualquier etapa de la infección.......

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1234- PCR digital (dPCR) como procedimiento de medición de referencia

Samreen Falak, Denise M O'Sullivan , Megan H Cleveland , Simon Cowen  y otros. Aplicación de la PCR digital como procedimiento de medición de referencia para respaldar la precisión del aseguramiento de la calidad de las pruebas de diagnóstico molecular de enfermedades infecciosas. Oxford Academic- Clin Chem 2025; 71(3): 378-386. Department, Biomedical Optics, Physikalisch-Technische Bundesanstalt, Berlin, Germany; Biological Metrology, National Measurement Laboratory (NML), LGC, London, United Kingdom y otras instituciones. 

Resumen Chat DeepSeek

El artículo explora la aplicación de la PCR digital (dPCR) como procedimiento de medición de referencia (RMP) para mejorar la precisión y la confiabilidad de las pruebas de diagnóstico molecular de enfermedades infecciosas. Destaca la creciente importancia de las mediciones precisas y estandarizadas en los diagnósticos clínicos, en particular para las enfermedades infecciosas, donde la cuantificación precisa de los patógenos es fundamental para el tratamiento eficaz y el manejo de la enfermedad. Los autores sostienen que la dPCR, con su alta precisión y sus capacidades de cuantificación absoluta, es adecuada para actuar como una RMP, proporcionando una base sólida para el control de calidad en el diagnóstico molecular.

Antecedentes y contexto

Las pruebas de diagnóstico molecular se han convertido en una piedra angular en la detección y el tratamiento de enfermedades infecciosas. Las técnicas como la PCR cuantitativa (qPCR) se utilizan ampliamente debido a su sensibilidad y especificidad. Sin embargo, la qPCR tiene limitaciones, incluida la variabilidad en la medición debido a la dependencia de curvas estándar y posibles sesgos introducidos durante la amplificación. Estas limitaciones pueden afectar la precisión y reproducibilidad de los resultados, lo que plantea desafíos para la toma de decisiones clínicas y el control de calidad.

Para abordar estos problemas, existe la necesidad de RMP que puedan proporcionar mediciones trazables y estandarizadas. Las RMP son métodos de alta precisión que se utilizan para calibrar y validar ensayos de diagnóstico de rutina, lo que garantiza la coherencia en todos los laboratorios y plataformas. El artículo propone la dPCR como un candidato prometedor para esta función, dada su capacidad para proporcionar cuantificación absoluta sin la necesidad de calibración externa.

PCR digital: principios y ventajas

La PCR digital es una mejora de la PCR tradicional que divide la muestra en miles de reacciones individuales, cada una de las cuales contiene un pequeño volumen del ácido nucleico objetivo. Al contar el número de reacciones positivas y negativas, la dPCR puede determinar la concentración absoluta de la molécula objetivo con alta precisión. Este método elimina la necesidad de curvas estándar, lo que reduce la variabilidad y mejora la precisión.

El artículo describe varias ventajas de la dPCR:

• Cuantificación absoluta: la dPCR proporciona una medición directa de los ácidos nucleicos objetivo, lo que la hace muy confiable para cuantificar objetivos de baja abundancia.
• Alta precisión: el proceso de partición reduce el impacto de los sesgos de amplificación, lo que da como resultado resultados más consistentes y reproducibles.
• Robustez: la dPCR es menos susceptible a los inhibidores y los efectos de la matriz, que pueden interferir con los ensayos de qPCR.
• Trazabilidad: la dPCR se puede utilizar para establecer materiales de referencia y calibradores, lo que respalda la estandarización en todos los laboratorios.

Aplicación en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

Los autores analizan el potencial de la dPCR para mejorar la precisión de los diagnósticos moleculares de enfermedades infecciosas. La cuantificación precisa de patógenos, como virus, bacterias y parásitos, es esencial para determinar la carga viral, controlar la respuesta al tratamiento y detectar la resistencia a los medicamentos. Sin embargo, los métodos actuales a menudo carecen de la precisión y la estandarización necesarias para una toma de decisiones clínicas confiable.

La dPCR puede abordar estos desafíos al servir como un RMP para el desarrollo y la validación de ensayos de diagnóstico. Por ejemplo, la dPCR se puede utilizar para:

• Calibrar ensayos de qPCR: al proporcionar valores de referencia para las concentraciones objetivo, la dPCR puede mejorar la precisión de las mediciones de qPCR.
• Validar nuevos ensayos: la dPCR se puede utilizar para verificar el rendimiento de nuevas pruebas de diagnóstico molecular, asegurando que cumplan con los estándares regulatorios y clínicos.
• Monitorear el control de calidad: la dPCR puede respaldar el desarrollo de materiales de control de calidad, lo que permite a los laboratorios monitorear el rendimiento de sus ensayos a lo largo del tiempo.

El artículo proporciona ejemplos de aplicaciones de la dPCR en las pruebas de enfermedades infecciosas, incluida la cuantificación del VIH, el virus de la hepatitis C (VHC) y el citomegalovirus (CMV). Estos ejemplos demuestran la capacidad de la dPCR para proporcionar mediciones precisas y reproducibles, incluso a bajas concentraciones, lo que la convierte en una herramienta valiosa para el diagnóstico clínico.

Desafíos y limitaciones

Si bien la dPCR ofrece ventajas significativas, el artículo también reconoce sus limitaciones y desafíos. Estos incluyen:

• Costo y complejidad: los instrumentos y reactivos de la dPCR pueden ser costosos, y la tecnología requiere capacitación y experiencia especializadas.
• Rendimiento: la dPCR generalmente tiene un rendimiento menor en comparación con la qPCR lo que puede limitar su uso en laboratorios clínicos de alto volumen.
• Estandarización: existe la necesidad de protocolos estandarizados y materiales de referencia para garantizar la coherencia en diferentes plataformas y laboratorios.
• Análisis de datos: la interpretación de los datos de dPCR puede ser compleja y requiere métodos estadísticos sólidos para garantizar resultados precisos.

A pesar de estos desafíos, los autores sostienen que los beneficios de la dPCR superan sus limitaciones, en particular en el contexto de los RMP y el control de calidad.

Conclusión

La aplicación de la dPCR como método de diagnóstico rápido representa un avance significativo en el diagnóstico molecular y ofrece una herramienta poderosa para garantizar la precisión y la confiabilidad de las pruebas de enfermedades infecciosas. Al proporcionar una cuantificación absoluta y una alta precisión, la dPCR puede abordar las limitaciones de los métodos actuales y respaldar el desarrollo de ensayos de diagnóstico estandarizados. Si bien aún existen desafíos, los beneficios potenciales de la dPCR la convierten en una tecnología prometedora para mejorar la toma de decisiones clínicas y los resultados de los pacientes.

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1233- Hepatitis autoinmunes

Benedetta Terziroli Beretta-Piccoli, Giorgina Mieli-Vergani, Diego Vergani. Hepatitis autoinmune: autoanticuerpos séricos en la práctica clínica. Epatocentro Ticino & Facoltà Di Scienze Biomediche, Università Della Svizzera Italiana, Lugano, Switzerland. Institute for Research in Biomedicine, Bellinzona, Switzerland

Resumen

Los autoanticuerpos circulantes son una herramienta diagnóstica clave en la hepatitis autoinmune (HAI), siendo positivos en el 95% de los casos si se analizan de acuerdo con las pautas específicas emitidas por the International Autoimmune Hepatitis Group. También permiten la distinción entre la HAI tipo 1, caracterizada por anticuerpos antinucleares y/o antimúsculo liso positivos, y la HAI tipo 2, caracterizada por anticuerpos antimicrosomales hepáticos renales tipo 1 positivos y/o anticitosol hepático tipo 1. El único autoanticuerpo específico de la HAI es el antiantígeno hepático soluble, y se encuentra en el 20-30% de las HAI tipo 1 y tipo 2. El anticuerpo anticitoplasma de neutrófilos es frecuentemente positivo en la HAI tipo 1, y también se asocia con la enfermedad inflamatoria intestinal y con la colangitis esclerosante primaria/autoinmune. El método de referencia para la prueba de autoanticuerpos sigue siendo la inmunofluorescencia indirecta en tejido triple (hígado, riñón y estómago de roedores), que permite la detección de la mayoría de las reactividades relevantes para el hígado, incluidos aquellos autoanticuerpos cuyos antígenos moleculares diana son desconocidos. Cabe destacar que el conocimiento actual sobre la importancia clínica de los autoanticuerpos se basa en estudios basados ​​en esta técnica. Sin embargo, la inmunofluorescencia requiere personal de laboratorio capacitado, depende del observador y carece de estandarización, lo que lleva a intentos continuos de reemplazar este método con ensayos automatizados, cuya sensibilidad y especificidad, sin embargo, requieren estudios adicionales antes de que puedan usarse como una alternativa confiable a la inmunofluorescencia; actualmente, pueden usarse como complemento de la inmunofluorescencia.

Introducción

La hepatitis autoinmune (HAI) es un trastorno inflamatorio crónico caracterizado por la pérdida de tolerancia a los autoantígenos hepáticos, lo que conduce a un ataque autoinmune al hígado. Las características clínicas de la enfermedad incluyen preponderancia femenina, niveles elevados de inmunoglobulina G (IgG) sérica, autoanticuerpos circulantes positivos, hepatitis de interfase en la histología hepática y una respuesta rápida al tratamiento con corticosteroides. La HAI afecta a todas las edades y razas, y se subdivide en tipo 1 (HAI-1) y tipo 2 (HAI-2): la HAI-1 es mucho más común y afecta tanto a niños como a adultos, mientras que la HAI-2 es principalmente una enfermedad pediátrica [ 3 ]. La HAI-1 se caracteriza por anticuerpos antinucleares (ANA) y/o anticuerpos antimúsculo liso (SMA) positivos, mientras que la HAI-2 se caracteriza por anticuerpos antimicrosomales renales hepáticos tipo 1 (LMK1) y/o anticuerpos anticitosol hepático tipo 1 (LC1) positivos.

 La presentación de la HAI es variable: puede presentarse de forma aguda con síntomas similares a los de la hepatitis viral, por ejemplo, malestar, náuseas/vómitos, anorexia, dolor articular y abdominal, acompañado de ictericia, orina oscura y heces pálidas; con insuficiencia hepática fulminante y encefalopatía; de forma insidiosa, con síntomas no específicos (fatiga progresiva, amenorrea, dolor de cabeza, anorexia, dolor articular y abdominal, diarrea, pérdida de peso), que duran desde 6 meses hasta algunos años antes del diagnóstico; con enfermedad hepática crónica establecida y complicaciones de cirrosis e hipertensión portal (hematemesis por varices esofágicas/gástricas, diátesis hemorrágica, esplenomegalia), sin antecedentes de ictericia o enfermedad hepática; y a veces se diagnostica después de un hallazgo incidental de niveles anormales de transaminasas, sin síntomas o signos hepáticos. Por lo tanto, la HAI debe excluirse en todos los pacientes para los que no se llega a un diagnóstico alternativo claro.

Aunque la HAI no tratada tiene un mal pronóstico, con una tasa de mortalidad del 56% durante un seguimiento de 30 a 72 meses, hasta el 90% de los pacientes responden bien al tratamiento inmunosupresor y tienen excelentes resultados a largo plazo: por lo tanto, el diagnóstico oportuno y el inicio adecuado del tratamiento son clave para prevenir la progresión de la enfermedad. 

Los autoanticuerpos circulantes representan una herramienta diagnóstica esencial en la práctica clínica, siendo positivos en hasta el 95% de los pacientes con HAI si se analizan de acuerdo con las pautas específicas  . Por lo tanto, el conocimiento del médico sobre la importancia clínica de la serología hepática autoinmune es un prerrequisito para solicitar adecuadamente las pruebas de autoanticuerpos y para interpretar los resultados de laboratorio. Por otro lado, el laboratorio clínico debe cumplir con las pautas establecidas sobre los métodos de prueba de serología hepática autoinmune, incluido el informe de todas las especificidades observadas al médico. Este artículo ofrece una descripción general completa de los métodos actuales de detección y sobre la importancia clínica de los autoanticuerpos en la HAI, así como sobre las perspectivas futuras para mejorar su utilidad clínica......

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El Rincón del Lector: En la solicitud de subvenciones al NIH eliminar referencias a tecnologías mRNA.

Arthur Allen, Stephanie Armour, Céline Gounder. Algunos científicos dijeron que los funcionarios del NIH les indicaron que en la solicitud de subvenciones eliminaran referencias a tecnologías mRNA. KFF Health News March 16, 2025.

Resumen Chat-Geminis

El artículo  informa que los funcionarios de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) han estado instando a los científicos a eliminar cualquier mención a la tecnología de vacunas de ARNm de sus solicitudes de subvenciones. Esta directiva ha suscitado inquietud entre los investigadores, que temen que indique un posible abandono de un campo prometedor de investigación médica, particularmente bajo el nuevo liderazgo del Departamento de Salud y Servicios Humanos (HHS).   

Según el artículo, dos investigadores confirmaron haber recibido dichas instrucciones. Un científico de un centro de investigación biomédica en Filadelfia compartió un correo electrónico que indicaba que un funcionario del proyecto del NIH había marcado su solicitud de subvención debido a un "componente de vacuna de ARNm". A otro científico de alto nivel en vacunas financiado por el NIH en el estado de Nueva York, cuyas solicitudes anteriores describían la eficacia de las vacunas de ARNm a pesar de que su investigación se centraba en otras partes, se le dijo que eliminara todas esas referencias en futuras presentaciones.   

Estas acciones han alimentado la especulación de que la administración Trump, en particular a través del secretario del HHS, Robert F. Kennedy Jr., pretende recortar o eliminar la financiación para la investigación de vacunas de ARNm. Un alto funcionario del Instituto Nacional del Cáncer confirmó que el director interino del NIH, Matthew Memoli, envió un correo electrónico indicando que todas las subvenciones, contratos o colaboraciones relacionadas con vacunas de ARNm se informaran al secretario Kennedy.

La preocupación surge del escepticismo bien documentado de Kennedy hacia las vacunas. A pesar de las promesas durante su proceso de confirmación en el Senado de proteger el "beneficio de la vacunación para la salud pública", sus acciones y declaraciones pasadas han indicado una postura negativa. Por ejemplo, ha culpado a la desnutrición de los brotes de sarampión y ha promovido tratamientos no probados, contradiciendo el consenso científico establecido sobre la eficacia y seguridad de las vacunas.   

El artículo destaca las posibles ramificaciones de tal cambio en la política de los NIH. La tecnología de ARNm ha sido fundamental en el rápido desarrollo de vacunas altamente efectivas contra la COVID-19 y es muy prometedora para la prevención y el tratamiento de otras enfermedades infecciosas como la gripe y el sida, así como en la terapia contra el cáncer.Actualmente, los NIH financian al menos 130 estudios que involucran tecnología de ARNm en vacunas COVID-19.   

Un exfuncionario del gobierno, familiarizado con las discusiones internas, declaró que la administración Trump pretende recortar algunas subvenciones para la investigación de vacunas de ARNm, aunque aún no se sabe cuándo. Esto coincide con un movimiento más amplio dentro de algunos círculos republicanos que cuestiona y restringe las vacunas de ARNm. En varios estados se han introducido leyes para prohibir o limitar estas vacunas, que en ocasiones incluyen sanciones para los médicos que las administren.   

Los científicos están preocupados por las implicaciones para su investigación y sus carreras. El científico de Nueva York expresó que eliminar la mención del ARNm les parecía "ridículo", pero reconoció el clima de temor entre los científicos especializados en vacunas, preocupados por la posible pérdida de empleos si sus subvenciones son rechazadas por cualquier motivo relacionado con el ARNm.   

Además, el artículo señala otras medidas de la nueva administración que han alarmado a la comunidad científica. Estas incluyen la cancelación de decenas de subvenciones de investigación centradas en comprender la reticencia a las vacunas y una supuesta instrucción de Matthew Memoli de que la agencia "ya no está interesada en comprender por qué la gente rechaza las vacunas" ni en explorar "formas de mejorar el interés y la adhesión a las vacunas".Además, según se informa, los CDC cancelaron una reunión pública de su Comité Asesor sobre el Panel de Inmunización y se están preparando para investigar un vínculo desacreditado entre el autismo y las vacunas, un tema frecuentemente planteado por Kennedy.   

En conclusión, el artículo de KFF Health News sugiere una tendencia preocupante: el escepticismo político hacia las vacunas de ARNm, en particular por parte de la nueva dirección del HHS, podría estar influyendo en las prioridades de financiación de las subvenciones de los NIH. Las supuestas instrucciones a los científicos para que eliminen las referencias de ARNm de sus solicitudes han suscitado temores de un retroceso significativo para esta área vital de la investigación médica, con posibles consecuencias para el desarrollo de futuros tratamientos y las carreras de los investigadores en este campo.   

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Cordiales saludos. 
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina

1232- Gammapatías monoclonales IgM

Jahanzaib Khwaja, Shirley D’Sa, Monique C. Minnema, Marie José Kersten, Ashutosh Wechalekar, Josephine M.I. Vos.Gammapatías monoclonales IgM de importancia clínica: diagnóstico y tratamiento. Hematologica 2022; 107 (9) (2022. University College London Hospital, London, UK; Department of Hematology, University Medical Center Utrecht, University Utrecht, Utrecht, the Netherlands 

Introducción : Chat DeepSeek. 

Las gammapatías monoclonales IgM son un grupo heterogéneo de trastornos caracterizados por la producción de una proteína monoclonal IgM por parte de células B clonales o células plasmáticas. Estos trastornos varían desde afecciones asintomáticas, como la gammapatía monoclonal IgM de significado incierto (GMSI), hasta afecciones malignas como la macroglobulinemia de Waldenström (WM) y otros trastornos linfoproliferativos. El artículo enfatiza la importancia de distinguir entre las gammapatías IgM clínicamente significativas y las no significativas, ya que su tratamiento y pronóstico difieren significativamente.

El espectro de las gammapatías monoclonales IgM incluye:

• GMSI IgM: una afección asintomática con un bajo riesgo de progresión a malignidad.
• Macroglobulinemia de Waldenström (WM): un linfoma linfoplasmocítico con afectación de la médula ósea y proteína monoclonal IgM.
• Trastornos relacionados con IgM: afecciones en las que la proteína monoclonal IgM causa directamente daño tisular o síntomas sistémicos, como neuropatía relacionada con IgM, enfermedad por crioaglutininas (CAD) y amiloidosis.
• Otros trastornos linfoproliferativos: incluidos el linfoma de la zona marginal y la leucemia linfocítica crónica (LLC) con paraproteína IgM.

Las gammapatías monoclonales IgM pueden provocar manifestaciones clínicas a través de varios mecanismos:

• Síndrome de hiperviscosidad: causado por altos niveles de IgM, que provoca síntomas como sangrado, alteraciones visuales y déficits neurológicos.
• Crioglobulinemia: proteínas IgM que precipitan a bajas temperaturas, lo que provoca vasculitis y daño orgánico.
• Fenómenos autoinmunes: como la enfermedad por crioaglutininas, donde los anticuerpos IgM causan hemólisis.
• Depósito tisular: como se observa en la amiloidosis relacionada con IgM, donde las cadenas ligeras se depositan en los tejidos, lo que provoca disfunción orgánica.

La fisiopatología de estos trastornos implica la proliferación clonal de células B o células plasmáticas, mutaciones genéticas (p. ej., MYD88, CXCR4) e interacciones con el microambiente de la médula ósea.

El diagnóstico de las gammapatías monoclonales IgM requiere un enfoque integral, que incluye:

• Evaluación clínica: evaluación de síntomas como fatiga, neuropatía, sangrado u organomegalia.

Pruebas de laboratorio:

• Electroforesis de proteínas séricas (SPEP) e inmunofijación para detectar y caracterizar la proteína monoclonal IgM.
• Cuantificación de los niveles de IgM.
• Evaluación de la viscosidad sérica en caso de sospecha de síndrome de hiperviscosidad.
• Evaluación de crioglobulinas y crioaglutininas.
• Biopsia de médula ósea: esencial para diagnosticar la WM y evaluar la carga clonal.
• Diagnóstico por imágenes: tomografía computarizada o tomografía por emisión de positrones para evaluar la linfadenopatía o la afectación de órganos.
• Pruebas genéticas: identificación de mutaciones como MYD88 L265P y CXCR4, que son comunes en la WM e influyen en el pronóstico y el tratamiento.

El artículo destaca la importancia de distinguir entre gammapatía monoclonal IgM, WM y trastornos relacionados con IgM, ya que su manejo difiere.

El manejo de las gammapatías monoclonales IgM depende del diagnóstico específico y la presentación clínica y generalmente requiere observación sin tratamiento, con monitoreo regular para la progresión.

Macroglobulinemia de Waldenström:

• Macroglobulinemia de Waldenström asintomática: se recomienda la observación hasta que se desarrollen los síntomas.
• WM sintomática: las opciones de tratamiento incluyen regímenes basados ​​en rituximab, inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton (BTK) (p. ej., ibrutinib) y combinaciones de quimioterapia.

Trastornos relacionados con IgM:

• Síndrome de hiperviscosidad: se utiliza plasmaféresis para reducir rápidamente los niveles de IgM, seguida de terapia sistémica.
• Enfermedad por crioaglutininas: el rituximab y los inhibidores de BTK son eficaces.
• Neuropatía relacionada con IgM: a menudo se utiliza inmunoterapia, que incluye rituximab e inmunoglobulina intravenosa (IVIG).
• Amiloidosis: el tratamiento implica quimioterapia y terapias dirigidas para reducir las células plasmáticas clonales.

El artículo destaca el papel de la medicina personalizada, con un tratamiento adaptado al perfil genético del paciente, la carga de la enfermedad y las comorbilidades.

El artículo analiza varias terapias prometedoras para las gammapatías monoclonales de IgM, entre ellas:

• Nuevos inhibidores de BTK: como el zanubrutinib y el acalabrutinib, que han demostrado eficacia en la WM.
• Inhibidores de BCL-2: como el venetoclax, que se está explorando en la WM y otros trastornos linfoproliferativos.
• Terapia con células CAR-T: en fase de investigación para la WM refractaria y otras neoplasias malignas relacionadas con IgM.
• Anticuerpos monoclonales anti-CD38: como el daratumumab, que se está estudiando en la WM y la amiloidosis relacionada con IgM.

Pronóstico

El pronóstico de las gammapatías monoclonales IgM varía ampliamente:

• MGUS IgM: generalmente tiene un curso benigno, con un bajo riesgo de progresión a WM u otras neoplasias malignas.
• WM: el pronóstico depende de factores como la edad, las mutaciones genéticas y la respuesta al tratamiento. The International Prognostic Scoring System for WM (IPSSWM) se utiliza para estratificar el riesgo.
• Trastornos relacionados con IgM: el pronóstico depende de la extensión del daño orgánico y la respuesta al tratamiento. .....

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Nueva presentación el 25 de Marzo
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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina