Jolaine M. Hines, Irina Bancos, Cristian Bancos, Raman D. Singh, Aditya V. Avula, William F. Young, Stefan K. Grebe, Ravinder J. Singh. Espectrometría de masas de alta resolución-masa precisa (HRAM): perfiles de esteroides en orina en el diagnóstico de los trastornos suprarrenales Clinical Chemistry 63:12 1824–1835 (2017). Immunochemical Core Laboratory, Department of Medicine, Division of Endocrinology, Information Technology, Department of Laboratory Medicine and Pathology, Mayo Clinic, Rochester, MN.
Antecedentes: el perfil de esteroides es una herramienta de diagnóstico prometedora en tumores suprarrenales, síndrome de Cushing (CS) y trastornos de la esteroidogénesis. Nuestro objetivo fue desarrollar un ensayo con múltiples esteroides usando cromatografía líquida de alta resolución-espectrometría de masas-masa precisa (HRAM-LC-MS) para validar el ensayo en pacientes con diversos trastornos suprarrenales. (HRAM - high-resolution accurate-mass spectrometry)
Métodos: se recolectaron muestras de orina de 24 horas en 114 controles y 71 pacientes con enfermedades suprarrenales. Se validó un método HRAM-LC-MS para el análisis cuantitativo de 26 metabolitos esteroideos en muestras de orina hidrolizada. Las diferencias en la excreción de esteroides entre los pacientes, se analizaron sobre la base de la desviación de la puntuación Z de los intervalos de referencia del control.
Resultados: los límites de cuantificación fueron 20 ng/mL. La linealidad de la dilución varió de 80% a 120% con un promedio de 93% a 110% para todos menos 2 analitos. La imprecisión intraensayo e interensayo varió de 3% a 18% para todos menos 1 analito. Las mujeres control tuvieron una menor excreción de precursores/metabolitos de andrógenos y glucocorticoides que los hombres (P menor 0.001), pero no se observaron diferencias en mineralocorticoides (P=0.06). Los andrógenos disminuyeron con la edad en ambos sexos (P menor 0.001). En comparación con los pacientes con adenoma adrenocortical (ACA), los pacientes con carcinoma adrenocortical (ACC) tenían 11 esteroides con puntajes Z incrementados , especialmente tetrahidro-11-deoxicortisol (14 frente a 0.5, P menor 0.001), pregnanetriol (7.5 frente a -0.4, P igual 0.001) y 5-pregnenetriol (5.4 vs -0.4, P = 0.01). El perfil de esteroides también demostró anormalidades en los metabolitos consistentes con defectos enzimáticos en la hiperplasia suprarrenal congénita y diferencias en la CS hipofisaria vs. suprarrenal.
Conclusiones: el ensayo HRAM-LC-MS cuantifica con éxito 26 esteroides en la orina. Las diferencias estadísticamente significativas en la producción de esteroides de ACC vs. ACA, adrenal vs. pitutaria CS y en hiperplasia suprarrenal congénita deberían permitir un mejor diagnóstico de los pacientes con estas enfermedades.
Introduccion
El análisis de esteroides suprarrenales desempeña un papel importante en el diagnóstico del síndrome de Cushing (CS) , los trastornos de la esteroidogénesis y los tumores suprarrenales. Con el tiempo, los ensayos con esteroides han mejorado en sensibilidad y especificidad analítica, siendo el estándar de referencia actual el LC-MS/MS.
Sin embargo, se ha sugerido que el rendimiento diagnóstico clínico de los ensayos modernos podría haber empeorado paradójicamente en comparación con los inmunoensayos más antiguos y menos específicos, en particular para CS, sugiriendo que podría ser beneficioso medir múltiples esteroides y sus metabolitos en forma simultánea para lograr una precisión diagnóstica óptima. Además, durante los últimos 5 a 6 años, un perfil de esteroides urinarios de 32 analitos medidos con GC-MS ha mostrado resultados prometedores como una herramienta de diagnóstico para distinguir el carcinoma adrenocortical (ACC) de un adenoma adrenocortical benigno (ACA), enfatizando aún más la importancia potencial de medir múltiples esteroides simultáneamente.
Sobre la base en estas observaciones, la metabolómica de esteroides podría estar preparada para tener un impacto sustancial en las pruebas de endocrinas. Desafortunadamente, los perfiles de esteroides son difíciles de implementar en el laboratorio clínico. Debido a la gran cantidad de esteroides naturales y sus metabolitos, hay muchos compuestos que están cerca de ser isobáricos o son isómeros. Muchos de estos compuestos no se pueden distinguir entre sí, utilizando espectrómetros de masa de baja resolución de filtración masiva, incluso cuando se usa MS/MS, por lo que se necesita una separación cromatográfica completa antes de la detección por espectrometría de masas. Esto a menudo requiere una cromatografía de gases, que es una metodología técnicamente mucho más exigente, y requiere más trabajo y tiempo que la mayoría de los métodos de LC-MS/MS. En consecuencia, estos ensayos prometedores aún no se utilizan ampliamente,
La cromatografía líquida, de alta resolución, espectrometría de masas- masa precisa (HRAM-LC-MS) podría ser una herramienta que puede superar los obstáculos para un uso más amplio de los perfiles de esteroides. Esta metodología está ganando popularidad rápidamente para el análisis clínico cuantitativo de pequeñas moléculas endógenas, pruebas de drogas anabólicas y proteínas.
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Dr. Anibal E. Bagnarelli, Bioquímico-UBA. Ciudad de Buenos Aires, Argentina
