Emi Takashita, Cameron R Wolfe, Jeremy C Jones. Métodos de laboratorio para el monitoreo de la resistencia antiviral de la influenza. IDSA, Oxfor Academic-The Journal of Infectious Diseases, 2025: 232 (IS3). Influenza Research Center, National Institute of Infectious Diseases, Japan Institute for Health Security, Tokyo, Japan y otras Instituciones
Resumen Chat Claude 4.5
Descripción general y propósito
El artículo menciona en que forma el monitoreo de susceptibilidad antiviral es un componente esencial de la vigilancia virológica que realizan los laboratorios que participan en el Sistema Mundial de Vigilancia y Respuesta a la Gripe de la OMS (GISRS). Desde 2011, el Grupo de Trabajo de Expertos de la OMS sobre la Vigilancia de la Susceptibilidad Antiviral de la Gripe (WHO-AVWG) publica anualmente recomendaciones para evaluar la susceptibilidad antiviral de los virus circulantes.
La revisión se centra en tres clases de antivirales actualmente aprobados:
- Bloqueadores M2: amantadina, rimantadina.
- Inhibidores de la neuraminidasa (IAN): oseltamivir, peramivir, zanamivir, laninamivir.
- Baloxavir: inhibidor más reciente de la endonucleasa ácida de la polimerasa (PA).
Contexto histórico
El artículo analiza dos importantes acontecimientos de resistencia que moldearon las prioridades actuales de vigilancia:
Bloqueadores de M2: Durante 2003-2004, en China, se observó un aumento repentino de virus A(H3N2) resistentes a los bloqueadores de M2, debido a una mutación S31N en la proteína M2. Estos virus se propagaron globalmente entre 2005 y 2006 y han permanecido como la principal causa de la gripe desde entonces. En consecuencia, la OMS ya no recomienda el uso de bloqueadores de M2 para la gripe estacional.
Inhibidores de la neuraminidasa: Los virus A(H1N1) portadores de la mutación NA-H275Y- que confiere resistencia cruzada a oseltamivir y peramivir- surgieron en Europa entre 2007 y 2008 y se propagaron globalmente en un año, a pesar del uso mínimo de antivirales. Esto fue posible gracias a que las mutaciones compensatorias restauraron la aptitud viral y los cambios antigénicos ayudaron al virus a evadir la inmunidad del huésped. Estos virus resistentes causaron fiebre prolongada y enfermedad prolongada, especialmente en niños.
Metodología de vigilancia: Los laboratorios de vigilancia utilizan dos enfoques principales para controlar la susceptibilidad a los antivirales de la gripe: la detección basada en secuencias de marcadores moleculares (sustituciones o deleciones de aminoácidos previamente asociadas con una susceptibilidad reducida o resistencia) y las pruebas in vitro con antivirales.
Los métodos de secuenciación incluyen:
- Secuenciación de Sanger : el método estándar, pero más lento (~24 horas).
- Pirosecuenciación: más rápida (entre 1,5 y 2 horas), de alto rendimiento, adecuada para laboratorios de salud pública.
- La secuenciación de próxima generación (NGS) que puede detectar subpoblaciones virales menores (cuasi-especies con frecuencias inferiores al 20 %), pero requiere un importante apoyo bioinformático y un tiempo de respuesta más prolongado (de 27 a 144 horas, según la plataforma).
El artículo subraya que los datos basados únicamente en secuencias tienen limitaciones importantes: los virus que carecen de marcadores de resistencia conocidos aún pueden portar mutaciones nuevas cuyos efectos se desconocen, y la misma mutación puede tener efectos diferentes dependiendo del trasfondo genético del virus.
Pruebas de susceptibilidad a NAI: la susceptibilidad a los inhibidores de la neuraminidasa (INA) se analiza mediante ensayos basados en la actividad de la neuraminidasa con pequeños sustratos sintéticos. Debido a la poca fiabilidad de los resultados de las pruebas, los laboratorios de vigilancia no utilizan ensayos de cultivo celular para los INA. En su lugar, emplean un ensayo sustituto, el ensayo de inhibición de la neuraminidasa, que mide la eficacia con la que un fármaco bloquea la actividad enzimática necesaria para la liberación viral de las células infectadas.
Pruebas de susceptibilidad al baloxavir: el baloxavir actúa bloqueando la actividad de la endonucleasa dependiente de la caperuza, necesaria para la síntesis del ARNm viral. La mutación de resistencia más frecuente que surge durante el tratamiento es PA-I38T , la cual se asocia con una eliminación viral prolongada, un rebote viral y un alivio tardío de los síntomas en los pacientes tratados. A diferencia de los INA, los laboratorios pueden evaluar la susceptibilidad al baloxavir mediante ensayos basados en cultivos celulares que analizan la replicación viral en presencia del fármaco.
Los Centros Colaboradores de la OMS emplean actualmente tres ensayos:
- La prueba de neutralización basada en imágenes de alto contenido (HINT).
- El ensayo de inhibición de la replicación de la influenza basado en neuraminidasa (IRINA).
- El ensayo de reducción de focos (FRA).
Examen clínico: Los médicos deben ser cautelosos al solicitar pruebas de resistencia en muestras aisladas de pacientes de alto riesgo. En particular, los pacientes inmunodeprimidos pueden presentar un control viral tardío y una resolución clínica prolongada, y son más propensos a desarrollar resistencia a los fármacos durante el tratamiento. Además, los niños presentan una eliminación viral más prolongada y en mayor cantidad, lo que facilita la selección de cepas resistentes en comparación con los adultos.
Conclusiones: El artículo subraya la necesidad de una vigilancia global armonizada, utilizando umbrales de cambio estandarizados para comparar datos entre laboratorios. Señala que, si bien el marco actual es sólido, persisten importantes deficiencias: los correlatos de laboratorio de la resistencia clínicamente relevante aún no están bien establecidos para la mayoría de las mutaciones. Los datos in vitro por sí solos no permiten predecir los resultados del tratamiento, que también se ven influenciados por el momento de inicio del tratamiento, la vía de administración, la virulencia viral y el estado inmunitario del huésped.
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Nueva presentación el 10 de Julio
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Cordiales saludos.
Ciudad de Buenos Aires. R. Argentina
