Parrow NL, Violet PC, Tu H, Nichols J, Pittman CA, Fitzhugh C, Fleming RE, Mohandas N, Tisdale JF, Levine M. Medición de la deformabilidad y heterogeneidad de los glóbulos rojos por Ektacitometria. J Vis Exp. 2018; 12: (131). Department of Pediatrics, Saint Louis University School of Medicine
(NE) Deformabilidad eritrocitaria es la habilidad de los eritrocitos para cambiar su forma bajo cierto nivel de estrés aplicado, sin que exista hemolisis (ruptura del corpúsculo) (Wikip)
Resumen
Resumen
La deformabilidad de los glóbulos rojos es característica de varios trastornos. En algunos casos, el grado de acentuada deformabilidad puede predecir la gravedad de la enfermedad o la aparición de complicaciones graves. La Ektacitometría utiliza la viscosimetría de difracción láser para medir la deformabilidad de los glóbulos rojos sujetos a un esfuerzo cortante creciente o un gradiente osmótico a un valor constante del esfuerzo de corte aplicado. Sin embargo, las mediciones de deforma directa son difíciles de interpretar cuando se mide sangre heterogénea que se caracteriza por la presencia de células rojas rígidas y deformables. Esto se debe a la incapacidad de las células rígidas para alinearse adecuadamente en respuesta al esfuerzo cortante y da como resultado un patrón de difracción distorsionado marcado por una disminución exagerada de la deformabilidad aparente . La medición del grado de distorsión proporciona un indicador de la heterogeneidad de los eritrocitos en la sangre . En la anemia de células falciformes, esto se correlaciona con el porcentaje de células rígidas, que refleja la concentración de hemoglobina y la composición de hemoglobina de los eritrocitos. Además de medir la deformabilidad , la ektacitometría de gradiente osmótico proporciona información sobre la fragilidad osmótica y el estado de hidratación de los eritrocitos. Estos parámetros también reflejan la composición de hemoglobina de los glóbulos rojos de pacientes con células falciformes. La ektacitometría mide la deformabilidad en poblaciones de glóbulos rojos y, por lo tanto, no proporciona información sobre la deformabilidad o las propiedades mecánicas de los eritrocitos individuales. En cualquier caso, el objetivo de las técnicas aquí descritas es proporcionar un método conveniente y confiable para medir la deformabilidad y la heterogeneidad celular de la sangre.. Estas técnicas pueden ser útiles para controlar los cambios temporales, así como la progresión de la enfermedad y la respuesta a la intervención terapéutica en varios trastornos. La célula de la anemia es un ejemplo bien caracterizado. Otros trastornos potenciales donde las mediciones de la deformabilidad y/o heterogeneidad de los glóbulos rojos son de interés incluyen la diabetes, la infección por Plasmodium, la deficiencia de hierro y las anemias hemolíticas debido a defectos de la membrana.
Introducción
La Ektacitometría proporciona una medida conveniente de la deformabilidad de los glóbulos rojos en respuesta a las alteraciones en el esfuerzo cortante (medido en pascales (Pa)) o la suspensión de la osmolalidad del medio.
Los parámetros pertinentes de la deformabilidad de los glóbulos rojos incluyen el índice de alargamiento máximo (EI Max), una medida de la deformabilidad máxima de un glóbulo rojo en respuesta al aumento del esfuerzo cortante, y el esfuerzo cortante ½ (SS ½), que es el esfuerzo cortante requerido para alcanzar la mitad máxima deformabilidad. La ektacitometría de gradiente osmótico tiene varios parámetros informativos: estos incluyen el índice de alargamiento mínimo (EI Min), que es una medida de la relación superficie-volumen y la osmolalidad a la que ocurre (O Min), que es una medida de la fragilidad osmótica.
EI Max y la osmolalidad en la que ocurre (O (EI Max)) proporcionan información sobre la flexibilidad de la membrana y el área de la superficie celular. La mitad del alargamiento máximo en el brazo hipertónico del gradiente osmótico está representado por EI hiper. EI hiper y la osmolalidad a la que ocurre, (O hiper), proporcionan información sobre la viscosidad intracelular de los glóbulos rojos que se determina por la concentración de hemoglobina.
La medición de la deformabilidad en sangre heterogénea se complica por el hecho de que las células rígidas, como los glóbulos rojos falciformes, no se alinean correctamente con la dirección del flujo, como las células deformables, en respuesta al aumento de la tensión de corte. En lugar de producir una imagen de difracción elíptica característica, las células rígidas producen un patrón esférico que da como resultado un patrón de difracción en forma de diamante cuando se superpone a la elipse producida por las células deformables. Se ha demostrado un patrón esférico que corresponde a células falciformes irreversiblemente al realizar ektacytometry en fracciones aisladas de células después de la centrifugación de densidad. El cálculo del índice de elongación incluye medidas tanto del eje largo como del eje corto de la elipse……….
Los parámetros pertinentes de la deformabilidad de los glóbulos rojos incluyen el índice de alargamiento máximo (EI Max), una medida de la deformabilidad máxima de un glóbulo rojo en respuesta al aumento del esfuerzo cortante, y el esfuerzo cortante ½ (SS ½), que es el esfuerzo cortante requerido para alcanzar la mitad máxima deformabilidad. La ektacitometría de gradiente osmótico tiene varios parámetros informativos: estos incluyen el índice de alargamiento mínimo (EI Min), que es una medida de la relación superficie-volumen y la osmolalidad a la que ocurre (O Min), que es una medida de la fragilidad osmótica.
EI Max y la osmolalidad en la que ocurre (O (EI Max)) proporcionan información sobre la flexibilidad de la membrana y el área de la superficie celular. La mitad del alargamiento máximo en el brazo hipertónico del gradiente osmótico está representado por EI hiper. EI hiper y la osmolalidad a la que ocurre, (O hiper), proporcionan información sobre la viscosidad intracelular de los glóbulos rojos que se determina por la concentración de hemoglobina.
La medición de la deformabilidad en sangre heterogénea se complica por el hecho de que las células rígidas, como los glóbulos rojos falciformes, no se alinean correctamente con la dirección del flujo, como las células deformables, en respuesta al aumento de la tensión de corte. En lugar de producir una imagen de difracción elíptica característica, las células rígidas producen un patrón esférico que da como resultado un patrón de difracción en forma de diamante cuando se superpone a la elipse producida por las células deformables. Se ha demostrado un patrón esférico que corresponde a células falciformes irreversiblemente al realizar ektacytometry en fracciones aisladas de células después de la centrifugación de densidad. El cálculo del índice de elongación incluye medidas tanto del eje largo como del eje corto de la elipse……….
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Dr. Anibal E. Bagnarelli, Bioquímico-Farmacéutico-UBA.
Ciudad de Buenos Aires, Argentina
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