988- Diagnóstico automatizado en parasitología

Sandra Valéria Inácio, Jancarlo Ferreira Gomes, Alexandre Xavier Falcão,  Bianca Martins dos Santos,  Felipe Augusto Soares, Saulo Hudson Nery Loiola,  Stefani Laryssa Rosa, Celso Tetsuo Nagase Suzuki, Katia Denise Saraiva Bresciani. Diagnóstico Automatizado: avances en el diagnóstico de infecciones parasitarias intestinales en humanos y animales. Front Vet Sci. 2021; 8: 715406. São Paulo State University (Unesp), School of Veterinary Medicine, Araçatuba, Brazil. Edited by Alessia Libera Gazzonis, University of Milan, Italy

Resumen de la publicación generada por ChatGPT-3.5;
al final se puede leer el articulo original

"Esta revisión integral reúne la experiencia de investigadores de varias instituciones, arrojando luz sobre los últimos avances en este campo. Desde el uso de tecnología de punta hasta el impacto potencial en la salud humana y animal, este artículo proporciona información valiosa sobre el futuro del diagnóstico de infecciones parasitarias.

1- ¿Cuáles son los métodos de diagnóstico automatizados clave que se analizan en esta revisión?

Los métodos clave de diagnóstico automatizado discutidos en esta revisión incluyen clasificadores supervisados, como el: clasificador bayesiano, las máquinas de vectores de soporte (SVM), las redes neuronales artificiales (ANN), el K-vecino más cercano (k-NN), el árbol de decisiones (DT) y el Optimum-Sendero Forestal (OPF) . Estos métodos se utilizan para la anotación de imágenes y la identificación de estructuras de parásitos en muestras fecales.

(N.del E.: El clasificador/aprendizaje supervisado, también conocido como machine learning supervisado, es una sub-categoría de machine learning y de inteligencia artificial. Se utiliza para el uso de un conjuntos de datos etiquetados para entrenar algoritmos que clasifican datos o prevén resultados con precisión.)

2- ¿Cómo benefician estos avances en el diagnóstico tanto a humanos como a animales?

"Los avances en el diagnóstico automatizado de infecciones parasitarias intestinales benefician tanto a humanos como a animales de varias maneras. En primer lugar, estos métodos automatizados ofrecen alta precisión en la identificación de la positividad del huésped y la carga parasitaria, lo que permite diagnósticos más precisos. Esto puede conducir a un tratamiento oportuno y específico, mejorando los resultados de salud tanto para humanos como para animales.

Además, los diagnósticos automatizados reducen el tiempo y el esfuerzo necesarios para contar huevos, quistes y ooquistes de helmintos y protozoos. En comparación con el proceso de microscopio tradicional, los diagnósticos automatizados ahorran tiempo y reducen la fatiga al eliminar la necesidad de contar manualmente en una pantalla de computadora. Esta mayor eficiencia permite procesar un mayor volumen de muestras en menos tiempo, lo que permite un diagnóstico y un tratamiento más rápidos.

Además, el uso de tecnologías computacionales y la producción de bases de datos visuales y textuales facilitan el almacenamiento y recuperación de información diagnóstica. Esto significa que los bioquímicos y veterinarios pueden acceder a los datos y analizarlos más fácilmente, lo que mejora la vigilancia, el seguimiento y el control de las infecciones parasitarias tanto en humanos como en animales.

En general, estos avances en el diagnóstico automatizado contribuyen a un diagnóstico más preciso y eficiente, un tratamiento más rápido y una mejor gestión de enfermedades tanto para humanos como para animales."

3- ¿Existen limitaciones o desafíos asociados con el diagnóstico automatizado de infecciones parasitarias intestinales?

"El artículo de revisión no proporciona una lista completa de limitaciones o desafíos asociados con el diagnóstico automatizado para infecciones parasitarias intestinales. Sin embargo, vale la pena señalar que la precisión de los diagnósticos automatizados depende de la calidad de las imágenes y los datos de entrenamiento utilizados para desarrollar los algoritmos. Por lo tanto, la calidad de las muestras fecales y la experiencia del personal que recolecta y procesa las muestras pueden afectar la precisión del diagnóstico automatizado.

Además, el costo de implementar diagnósticos automatizados puede ser una barrera para su adopción generalizada, particularmente en entornos de bajos recursos. La necesidad de equipo especializado y personal capacitado también puede limitar la accesibilidad de los diagnósticos automatizados en algunas regiones."

4- ¿Qué pasa con los avances y límites de las técnicas de diagnóstico computacional para la identificación de parásitos intestinales?

"El artículo de revisión reconoce que ha habido avances significativos en las técnicas de diagnóstico computacional para la identificación de parásitos intestinales durante la última década. Los investigadores han estado trabajando en modelos de procesamiento de imágenes digitales y técnicas de patrones para reconocer automáticamente los huevos de parásitos en imágenes microscópicas. El objetivo principal de estos avances es reducir los errores humanos que ocurren en el diagnóstico de parásitos fecales y producir resultados más rápidos y precisos.

Estas técnicas de diagnóstico computacional ofrecen el potencial para mejorar la eficiencia y confiabilidad de la identificación de parásitos. Su objetivo es superar las limitaciones de los métodos de microscopía tradicionales, como el proceso de conteo manual que requiere mucho tiempo, mano de obra calificada y el potencial del error humano. Al automatizar el proceso de identificación, estas técnicas pueden brindar resultados más rápidos y precisos, lo que lleva a un tratamiento oportuno y específico.

Sin embargo, el artículo de revisión también reconoce que aún existen desafíos y limitaciones que deben abordarse para garantizar la identificación adecuada de los parásitos. Estos desafíos incluyen el desarrollo de protocolos para la preparación de portaobjetos de microscopio con menos residuos y garantizar una buena tinción de las estructuras del parásito. Además, la creación de una base de datos de imágenes robusta es crucial para el éxito de estas técnicas computacionales.

En resumen, si bien ha habido avances significativos en las técnicas de diagnóstico computacional para la identificación de parásitos intestinales, aún existen desafíos que deben superarse para garantizar su precisión y eficacia. Se necesita más investigación y desarrollo para optimizar estas técnicas y abordar las limitaciones asociadas con ellas".

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(*) Una vez que esta en la pagina del articulo, pulsando el botón derecho puede acceder a su  traducción al idioma español Este blog de bioquímica-clínica está destinado a bioquímicos y médicos; la información que contiene es de actualización y queda a criterio y responsabilidad de los mencionados profesionales, el uso que le den a la misma. Nueva presentación el  20 de julio. 
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Cordiales saludos. 
Ciudada de Buenos Aires. R. Argentina

987- Vectores virales artificiales para remodelar el genoma humano

Jingen Zhu, Himanshu Batra, Neeti Ananthaswamy, Marthandan Mahalingam, Pan Tao, Xiaorong Wu, Wenzheng Guo, Andrei Fokine, Venigalla B. Rao. Diseño de vectores virales artificiales basados ​​en el bacteriófago T4 para la remodelación del genoma humano. Nature Communications vol 14, Article number: 2928 (2023). Bacteriophage Medical Research Center, Department of Biology, The Catholic University of America, Washington DC, USA. 

Abstracto

El diseño de vectores virales artificiales (AVV) programados con biomoléculas que puedan ingresar a las células humanas y realizar reparaciones moleculares tendrá amplias aplicaciones. Aquí, describimos un enfoque de línea de montaje para construir AVV mediante la ingeniería de los componentes estructurales bien caracterizados del bacteriófago T4. Comenzando con una cubierta de cápside de 120 × 86 nm que puede acomodar ADN de 171 Kbp y miles de copias de proteínas, se incorporan externa e internamente varias combinaciones de biomoléculas, incluidos ADN, proteínas, ARN y ribonucleoproteínas. Luego, las nanopartículas se recubren con lípidos catiónicos para permitir una entrada eficiente en las células humanas. Como prueba de concepto, ensamblamos una serie de AVV diseñados para administrar distrofina de longitud completa-gene o realizar varias operaciones moleculares para remodelar el genoma humano, incluida la edición del genoma, la recombinación de genes, el reemplazo de genes, la expresión de genes y el silenciamiento de genes. Estos AVV de gran capacidad, personalizables, multiplexados y basados ​​en fagos todo en uno representan una categoría adicional de nanomaterial que podría transformar potencialmente las terapias génicas y la medicina personalizada.

Introducción

Los virus son los organismos más abundantes y extendidos en la Tierra. También son algunas de las máquinas biológicas más eficientes. A pesar de su pequeño tamaño y su composición genética simple, los virus pueden causar infecciones mortales y pandemias globales, como el SIDA, la gripe y el COVID-19. Esto se debe a que los virus desarrollaron mecanismos eficientes para replicarse y ensamblar progenie en escalas de tiempo rápidas, del orden de minutos en el caso de virus bacterianos (bacteriófagos o simplemente fagos). 

Si algunos de los mecanismos virales eficientes pudieran aprovecharse mediante la construcción de vectores virales artificiales (AVV), programados con moléculas terapéuticas, tales virus, en lugar de replicarse en el huésped, podrían realizar reparaciones beneficiosas para restaurar la salud humana. Dichos AVV podrían potencialmente reemplazar genes defectuosos, producir moléculas terapéuticas, matar células cancerosas, etc. A pesar de muchos intentos a lo largo de los años  el desarrollo de los AVV se mantuvo en una etapa temprana.

Los virus humanos naturales, los virus adenoasociados (AAV) con un genoma de ADN monocatenario de ~5 Kbp de tamaño y los lentivirus con un genoma de ARN monocatenario de ~10 Kbp de tamaño han sido diseñados para administrar ADN o ARN terapéutico como parte de su genoma . Sin embargo, estos vectores virales tienen limitaciones. En el mejor de los casos, pueden administrar uno o dos genes terapéuticos y plantean dificultades para incorporar moléculas terapéuticas adicionales esenciales para reparaciones complejas. Las preocupaciones de seguridad, como la amplia infectividad de las células humanas, la inmunidad preexistente y la posible integración en el genoma del huésped, son problemas adicionales graves 

Aquí, describimos una plataforma AVV usando el fago T4. que pertenece a la familia Straboviridae e infecta a la bacteria Escherichia coli . Con una eficacia de infección cercana al 100 %  y replicando a una velocidad de ~20-30 min por ciclo, el T4 es uno de los virus más eficaces que se conocen. Contiene una gran cápside icosaédrica alargada de 120 × 86 nm (cabeza) ensamblada con 930 moléculas o 155 capsómeros hexamérica de la principal proteína gp23* de la cápside (* representa la forma madura escindida), 55 copias u 11 pentámeros de gp24* en once de los doce vértices y 12 copias de la proteína portal gp20 en el duodécimo vértice único (Fig.  1a-c ). El vértice del portal es una estructura de anillo con un canal central de ~35 Å a través del cual el genoma viral se transporta a la cápside mediante un motor molecular pentamérico alimentado por ATP conectado a él (Fig. 1c ). Después de empaquetar una cabeza de genoma, equivalente a ~171 Kbp de dsDNA lineal, 26 , 27 , el motor se disocia y las proteínas del cuello se ensamblan, seguido por el ensamblaje de la cola y la fibra de la cola para generar un virión infeccioso....

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina

986- Cestodes

Ellen J. Lesh; Mark F. Brady. "Tenia". Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2023 Jan. Alpert Medical School of Brown University.

Resumen

Los cestodos son tenias planas, parásitas y hermafroditas con ciclos de vida complejos que infectan a los animales, incluidos los humanos. Tres cestodos que causan enfermedades en humanos son Taenia solium (tenia de cerdo), Taenia saginata (tenia de ganado) y Diphyllobothrium (tenia de pescado). Esta presentacion repasa el diagnóstico y  tratamiento de estas infecciones y destaca el papel del equipo interprofesional en estas patologías.

Objetivos

• Describir la transmisión de Taenia solium, Taenia saginata y Diphyllobothrium.
• Resumir la historia y los hallazgos del examen físico esperados en pacientes con estas infecciones.
• Resumir las opciones de diagnóstico y tratamiento para estas infecciones.
• Revisar la importancia de la colaboración y la comunicación entre el equipo interprofesional para el control y cuidado del paciente con estas patologias.................                                

Diagnóstico

1- El diagnóstico de un paciente con síntomas de neurocisticercosis (NCC) se basa principalmente en el examen microscópico de las heces en busca de la presencia de huevos de Taenia. Aunque esto permite el diagnóstico del género del parásito, a menudo no distingue entre especies. Las pruebas moleculares en suero y heces pueden ayudar en el diagnóstico y  diferenciación de especies. La NCC requiere una combinación de pruebas moleculares e imágenes. La eosinofilia a menudo está presente, pero rara vez aumenta más del 50%. Es más probable un aumento del 1% al 15%, y los niveles de IgE en suero también pueden aumentar. Los huevos de T. saginata y T. solium pueden identificarse pero no diferenciarse mediante el examen microscópico de las heces.  La especie se puede distinguir por un proglótido según el número de ramas uterinas.  El examen de heces puede ser menos eficaz en el caso de T. saginata , ya que las proglótides grávidas a menudo emergen espontáneamente a través del ano y depositan huevos en las regiones perianal y perineal.  Por lo tanto, se puede recomendar un hisopo anal para la recuperación de óvulos. Independientemente, el diagnóstico de Taenia se basa en la microscopía directa de los huevos expulsados ​​en las heces a pesar de la baja sensibilidad dada la naturaleza intermitente de la eliminación de los huevos (la sensibilidad oscila entre el 3,9 % y el 52,5 %).  

La detección ELISA de Copro-Ag (a partir de muestras de heces) no depende de la eliminación activa de huevos para la detección positiva. Sin embargo, esto no puede distinguir entre especies y puede haber reactividad cruzada con otros parásitos, incluidos Ascaris, Trichuris, Hymenoplepis nana y otros protozoos. Se ha demostrado que las pruebas de copro-Ag logran una sensibilidad del 98 % y una especificidad del 99 % en comparación con la sensibilidad del 38 % con microscopía directa. Para el diagnóstico específico de especie, la PCR por secuencias de genes de T. solium logra una especificidad del 100 % y una sensibilidad del 97 % al 100 %. Las pruebas de suero incluyen un ensayo de inmunotransferencia para la detección de anticuerpos para antígeno excretor-secretor (TSES) de T.solium que una sensibilidad del 95 % y una especificidad del 100 %. 

2- La difilobotriasis también se basa en el examen de heces en busca de huevos distintos, que pueden clasificar el género pero no la especie. Los métodos moleculares, como la PCR de muestras de heces, son el método más confiable para identificar a nivel de especie. No hay pruebas serológicas confiables para ayudar en el diagnóstico. Tanto para Diphyllobothrium  como para Taenia, no existe una razón clínica para distinguir entre especies ya que el tratamiento es el mismo; sin embargo, identificar las distintas especies ayudará en el cuadro epidemiológico de la transmisión y los casos importados.

3- Dado que los quistes en la mayoría de los tejidos son asintomáticos o están destruidos, rara vez se detectan o diagnostican. Sin embargo, la NCC conduce a lesiones quísticas visibles en el sistema nervioso central (SNC) y a una sintomatología importante y variable. Una gran parte de la patología del NCC se debe a la respuesta inmune del huésped al quiste larvario de T. solium. Una vez que el quiste está en el tejido, el sistema inmunitario del huésped induce la formación de granulomas y edema perilesional. En la etapa inicial de NCC, hay un quiste viable con inflamación periquística mínima. A medida que aumenta la respuesta inmunitaria del huésped, la inflamación perilesional matará al quiste, el líquido dentro del quiste se vuelve denso y  se encoge hasta que finalmente se elimina o se reemplaza con calcificación residual. La resonancia magnética y la tomografía computarizada pueden identificar lesiones granulomatosas calcificadas “con realce en anillo” que se encuentran en el cerebro. El diagnóstico de NCC depende de la sospecha radiológica y la interpretación congruente de la serología. La radiología puede clasificar la degeneración y el grado de inflamación, pero también se utiliza para controlar la eficacia del tratamiento.  

4- La serología ayuda a confirmar el diagnóstico. La serología para NCC incluye la detección de anticuerpos y antígenos a través de muestras de suero y LCR, respectivamente. Aunque la detección de antígenos es posible con suero y orina, se encontró que era mayor en LCR. El ensayo de inmuno-electrotransferencia ligado a enzimas (EITB) en suero para la detección de anticuerpos contra los quistes de T. solium tiene una especificidad del 98 % al 100 % en pacientes con más de un quiste cerebral viable; sin embargo, EITB tiene poca sensibilidad para una sola lesión cerebral.  La detección de anticuerpos no indica cisticercosis activa, ya que esto puede resultar de la exposición sola e infecciones que no se establecieron o no se resolvieron. 

La vida útil de los anticuerpos es variable y depende del historial inmunitario del huésped y de la carga de la infección. Algunos pacientes con antecedentes de quistes múltiples pueden tener anticuerpos positivos durante años después del tratamiento exitoso. Las pruebas ELISA basadas en monoclonales para la detección de antígenos pueden demostrar la presencia de parásitos vivos. Los niveles de antígeno caen rápidamente después del tratamiento, mientras que los anticuerpos pueden permanecer detectables. Es raro que la conversión a anticuerpos negativos ocurra en menos de 1 año, pero es un marcador de cura. En general, las pruebas positivas de anticuerpos y antígenos para NCC sugieren una infección viable. 

Una sola lesión en las imágenes (o una carga de infección baja) puede dar negativo para ambas. Los pacientes que solo tienen lesiones calcificadas suelen ser negativos para antígenos, pero pueden ser negativos o positivos para anticuerpos. Si las imágenes muestran solo lesiones calcificadas y el paciente tiene una prueba de antígeno positiva, se debe sospechar que se ha pasado por alto una lesión viable. El NCC subaracnoideo se asocia con altos niveles de anticuerpos y antígenos. Por lo tanto, las imágenes positivas con resultados negativos o débilmente positivos deben generar dudas sobre el diagnóstico.

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
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Ciudada de Buenos Aires. R. Argentina

985- El ChatBot y las publicaciones cientificas

Gemma Conroy-Editor. Los científicos usaron ChatGPT para generar un documento completo desde cero, pero ¿es bueno?. Nature  news  article  07 July 2023

Utilizando el  chatbot en cada paso, los investigadores produjeron un documento fluido y perspicaz. Sin embargo, todavía tienen preocupaciones.

Un par de científicos ha producido un trabajo de investigación en menos de una hora con la ayuda de ChatGPT, una herramienta impulsada por inteligencia artificial (IA) que puede comprender y generar texto similar al humano. El artículo fue fluido, perspicaz y se presentó con la estructura esperada de un artículo científico, pero los investigadores dicen que hay muchos obstáculos que superar antes de que la herramienta pueda ser realmente útil.

El objetivo era explorar las capacidades de ChatGPT como 'copiloto' de investigación y provocar un debate sobre sus ventajas y desventajas, dice Roy Kishony, biólogo y científico de datos del Technion, el Instituto de Tecnología de Israel en Haifa. “Necesitamos una discusión sobre cómo podemos obtener los beneficios con menos desventajas”, dice.

Kishony y su alumno Tal Ifargan, un científico de datos que también trabaja en Technion, descargaron un conjunto de datos disponible públicamente del Sistema de Vigilancia de Factores de Riesgo del Comportamiento de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU., una base de datos de encuestas telefónicas relacionadas con la salud. El conjunto de datos incluye información recopilada de más de 250 000 personas sobre su estado de diabetes, consumo de frutas y verduras y actividad física.

Los bloques de construcción en un papel.

Los investigadores le pidieron al ChatGPT que escribiera un código que pudieran usar para descubrir patrones en los datos para pudieran analizarlos más a fondo. En su primer intento, el Chatbot generó un código que estaba plagado de errores y no funcionó. Pero cuando los científicos transmitieron los mensajes de error y le pidieron que corrigiera los errores, finalmente produjo un código que podría usarse para explorar el conjunto de datos.

Con un conjunto de datos más estructurado en la mano, Kishony e Ifargan le pidieron a ChatGPT que los ayudara a desarrollar un objetivo de estudio. La herramienta sugirió que exploraran cómo la actividad física y la dieta afectan el riesgo de diabetes. Una vez que generó más código, ChatGPT entregó los resultados: comer más frutas y verduras y hacer ejercicio está relacionado con un menor riesgo de diabetes. 

Luego se le pidió a ChatGPT que resumiera los hallazgos clave en una tabla y escribiera la sección de resultados completa. Paso a paso, le pidieron a ChatGPT que escribiera las secciones de Resumen, Introducción, Métodos y Discusión de un manuscrito. Finalmente, le pidieron a ChatGPT que refinara el texto. “Escribimos el documento a partir de la salida de muchas indicaciones”, dice Kishony. “Cada paso se basaba en los productos de los pasos anteriores”.

Aunque ChatGPT generó un manuscrito claramente escrito con un sólido análisis de datos, el documento estuvo lejos de ser perfecto, dice Kishony. Un problema que encontraron los investigadores fue la tendencia de ChatGPT a llenar los vacíos inventando cosas, un fenómeno conocido como "alucinación". En este caso, generó citas falsas e información inexacta. Por ejemplo, el documento afirma que el estudio "aborda un vacío en la literatura", una frase que es común en los documentos pero inexacta en este caso, dice Tom Hope, científico informático de la Universidad Hebrea de Jerusalén. El hallazgo “no es algo que vaya a sorprender a ningún experto médico”, dice. “No está cerca de ser novedoso”.

Beneficios y preocupaciones

A Kishony también le preocupa que tales herramientas puedan facilitar que los investigadores se involucren en prácticas deshonestas como el P-hacking, para el cual los científicos prueban varias hipótesis en un conjunto de datos, pero solo informan aquellas que producen un resultado significativo.

Otra preocupación, agrega,  es que la facilidad de producir artículos con herramientas generativas de IA podría resultar en que las revistas se inunden con artículos de baja calidad. Menciona que su enfoque de datos en papel, con supervisión humana central en cada paso, podría ser una forma de garantizar que los investigadores puedan comprender, verificar y replicar fácilmente los métodos y hallazgos.......

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
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Ciudada de Buenos Aires. R. Argentina

 

984- Deteccion simultanea de varios parasitos por PCR.

Alejandro Dashti, Henar Alonso, Cristina Escolar-Miñana, Pamela C. Köster, Begoña Bailo, David Carmena, David González-Barrio William Lainhart, Editor.Evaluación de un nuevo ensayo comercial de PCR en tiempo real para la detección simultánea de Cryptosporidium spp., Giardia duodenalis y Entamoeba histolytica. Microbiol Spectr. 2022; 10(3): e00531-22. Parasitology Reference and Research Laboratory, National Centre for Microbiology, Carlos III Health Institute, Madrid, Spain. University of Arizona/Banner Health. 

Resumen de la publicación generada por ChatGPT-3.5;
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"Este estudio proporciona información valiosa sobre el alto rendimiento de diagnóstico y la rentabilidad de la multiplexación en la detección por PCR Viasure en las siguientes especies de protozoos que causan diarrea: Cryptosporidium spp., Giardia duodenalis y Entamoeba histolytica (CGE) 

Preguntas

1- ¿Cuáles fueron los hallazgos clave de la evaluación clínica del ensayo de PCR en tiempo real Viasure para CGE? Los hallazgos clave de la evaluación clínica del ensayo de PCR en tiempo real Viasure son los siguientes:

• El ensayo  demostró un buen rendimiento para las pruebas de rutina de CGE en laboratorios microbiológicos clínicos. 
• El ensayo identificó correctamente el 94,8 % (91/96 muestras) de las muestras de ADN que dieron positivo para CGE.
• Los valores de sensibilidad para los tres parásitos protozoarios variaron de 0,94 a 0,96, los valores de especificidad de 0,99 a 1, los valores predictivos positivos de 0,99 a 1 y los valores predictivos negativos de 0,98 a 0,99.

Estos hallazgos indican que el ensayo de PCR en tiempo real VIASURE es efectivo para detectar e identificar estos parásitos protozoarios que causan diarrea, proporcionando resultados rápidos y precisos para el diagnóstico clínico.

2- ¿Cómo mejora la multiplexación la precisión y la eficiencia de la detección de múltiples especies de parásitos en una sola prueba?

La multiplexación, que se refiere a la detección de más de un parásito en una sola prueba mediante PCR en tiempo real, permite un alto rendimiento diagnóstico con una rentabilidad favorable. Al combinar múltiples ensayos de PCR en una sola reacción, la multiplexación puede mejorar la precisión y la eficiencia en la detección de múltiples especies de parásitos de varias maneras:

• Tiempos prácticos y de respuesta reducidos: la multiplexación reduce el tiempo y la mano de obra necesarios para realizar múltiples ensayos de PCR por separado, lo que permite realizar pruebas más rápidas y eficientes.
• Detección de heces de alto rendimiento: la multiplexación permite la detección simultánea de múltiples especies de parásitos en una gran cantidad de muestras de heces, lo que la hace ideal para la detección de grandes poblaciones.
• Cuantificación de la carga de patógenos: la multiplexación permite la cuantificación de la carga de patógenos, que puede servir como indicador potencial de la gravedad de la enfermedad.
• Implementación personalizada y rentable: la multiplexación se puede adaptar a las necesidades específicas de los laboratorios clínicos, lo que permite una implementación rentable en algoritmos de diagnóstico de rutina.

En general, la multiplexación ofrece un enfoque más eficiente y rentable para detectar múltiples especies de parásitos en entornos clínicos.

3- ¿Cuáles son las implicaciones de este estudio para el diagnóstico y tratamiento de infecciones asintomáticas y crónicas causadas por CGE?

El estudio tiene varias implicaciones para el diagnóstico y tratamiento de infecciones asintomáticas y crónicas causadas por CGE:

• Mayor precisión y eficiencia del diagnóstico: el ensayo de PCR en tiempo real Viasure demostró un buen rendimiento para las pruebas de rutina de estos parásitos protozoarios en laboratorios microbiológicos clínicos, proporcionando resultados rápidos y precisos para el diagnóstico clínico.
• Detección y tratamiento tempranos: el alto rendimiento diagnóstico del ensayo  puede facilitar la detección y el tratamiento tempranos de estas infecciones, lo que puede ayudar a prevenir el desarrollo de enfermedades crónicas y graves.
• Pruebas rentables: la multiplexación permite una implementación rentable en los algoritmos de diagnóstico de rutina de los laboratorios clínicos de acuerdo con sus necesidades específicas, lo que la convierte en una opción atractiva para los programas de detección y vigilancia a gran escala.
• Riesgo reducido de diagnóstico erróneo: la multiplexación puede reducir el riesgo de diagnóstico erróneo, que es una preocupación para las infecciones asintomáticas y crónicas.

El estudio sugiere que el ensayo de PCR en tiempo real Viasure es una herramienta valiosa para el diagnóstico y el tratamiento de estos parásitos protozoarios comunes que causan diarrea, con beneficios potenciales para la salud pública y la práctica clínica".

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983- Enfermedad de Chagas en paises no endémicos

Cristina Suárez, Debbie Nolder, Ana García-Mingo, David A J Moore, Peter L Chiodini. Diagnóstico y control clínico de la enfermedad de Chagas: un desafío creciente en áreas no endémicas. Dove Press- Res Rep Trop Med. 2022; 13: 25–40.  Chagas Hub, London, Department of Infection, Barts Health NHS Trust, London, UK.

Resumen

La enfermedad de Chagas (EC) es causada por el parásito Trypanosoma cruzi, y es endémica de América Central, Sur de México y  Sur de los Estados Unidos. Es una causa importante de mortalidad y morbilidad precoces, y está asociada con la pobreza y el estigma. Un tercio de los casos evolucionan a miocardiopatía crónica y enfermedad gastrointestinal. La infección se transmite verticalmente y por donación de sangre/órganos y puede reactivarse con inmunosupresión. La identificación de casos requiere programas de concientización y tamizaje dirigidos a la población de riesgo (mujeres en edad reproductiva, donantes, pacientes inmunocomprometidos). El tratamiento con benznidazol o nifurtimox es más efectivo en la fase aguda y previene la progresión a la fase crónica cuando se administra a niños. El tratamiento prenatal de las mujeres reduce, pero no elimina, la transmisión vertical. El tratamiento es mal tolerado, contraindicado durante el embarazo, y tiene poco efecto modificando la enfermedad en la fase crónica. La detección se realiza fácilmente con serología. La migración ha llevado la enfermedad fuera de los países endémicos, donde la transmisión continúa verticalmente y a través de donaciones de sangre y tejidos/órganos. Hay más de 32 millones de migrantes de América Latina que viven en países no endémicos. Sin embargo, la infección está masivamente infra-diagnosticada en este medio debido a la falta de concientización por parte de pacientes, autoridades sanitarias y profesionales. Las políticas de control y detección en la donación de sangre y tejidos han reducido significativamente la transmisión en países endémicos, pero no están universalmente establecidas en el entorno no endémico. La detección prenatal no se realiza comúnmente. Otros desafíos incluyen las dificultades para acceder y retener a los pacientes en el sistema de salud y la falta de financiamiento específico para las intervenciones. Toda estrategia debe ir acompañada de campañas de educación y sensibilización dirigidas a pacientes, profesionales y responsables políticos. La participación de los pacientes y sus comunidades es central y clave para el éxito y debe buscarse de manera temprana y activa. Esta revisión propone estrategias para abordar los desafíos que enfrentan los países no endémicos.

Introducción

La enfermedad de Chagas (EC) o tripanosomiasis americana es una enfermedad parasitaria desatendida asociada con una mortalidad y una morbilidad significativas que incluyen discapacidad a largo plazo, estigma social y un costo de salud mental. Percibida como una enfermedad de los más pobres, esta infección, antes limitada a las zonas rurales de América Latina (AL), ahora se ha propagado a través de la migración a áreas y países no endémicos, donde la transmisión se mantiene por vías no vectoriales. La falta de conciencia individual e institucional, particularmente en países no endémicos, contribuye a perpetuar el ciclo al no identificar a los individuos con la enfermedad o en riesgo de adquirirla, y las oportunidades de tratamiento y prevención. 

Esta revisión tiene como objetivo, un enfoque específico en países no endémicos. A saber:  1) resumir el conocimiento actual en epidemiología, diagnóstico, estrategias de tratamiento y prevención en EC; 2) proponer estrategias para implementar programas de detección y tratamiento; y 3) identificar desafíos comunes.

Métodos

Revisión bibliográfica no sistemática de artículos, libros de texto y literatura gris relevantes (documentos de políticas, guías locales y nacionales disponibles, redes sociales y sitios web de pacientes y organizaciones públicas que trabajan con EC). Los autores también describen su propia experiencia en el tratamiento de pacientes con EC y la implementación de un programa de detección y tratamiento en Londres, como miembros del Chagas Hub del Reino Unido. 

Epidemiología: Causa, Patogenia y Mecanismos de Transmisión

La EC es causada por el protozoo hemoflagelado Trypanosoma cruzi , que se transmite en áreas endémicas por especies de insectos triatominos succionadores de sangre, activos durante la noche (Triatoma, Panstrongylus, y Rhodnius) que viven en techos y grietas de paredes de casas y estructuras peridomésticas. Las formas flageladas o infectivas del parásito (tripomastigote) son transportadas en la sangre del huésped y adquiridas por el insecto vector durante una ingesta de sangre; el parásito luego se desarrolla en el intestino medio del insecto en epimastigote y más tarde en formas metacíclicas de tripomastigote que se excretan con las heces. Estos se introducen en el huésped a través de roturas en la piel (después o no de una mordedura) o membranas mucosas e invaden las células del huésped donde se dividen intracelularmente para formar nidos de formas de amastigotes no flagelados. Estos pueden permanecer inactivos dentro de las células, pero también pueden revertirse a tripomastigotes y liberarse al torrente sanguíneo, desde donde pueden infectar otras células o ser adquiridos por el insecto vector, cerrando el ciclo. El T. cruzi infecta a una amplia gama de mamíferos domésticos y salvajes que mantienen los ciclos de vida domésticos y silvestres. 

El Trypanosoma cruzi responsable de la EC se puede agrupar en siete unidades de tipificación discretas (UTD), linajes genéticos, TcI a TcVI 5 y Tcbat. Los parásitos TcI-TcVI, tradicionalmente asociados con la EC, tienen diversos nichos ecológicos en áreas endémicas y las asociaciones entre el linaje del parásito y la presentación clínica no están claramente definidas. El Tcbat, un linaje encontrado recientemente en un caso humano en Ecuador, está muy relacionado con el clado TcI; sin embargo, se desconoce su significado clínico.

La transmisión implica la adquisición de formas infecciosas del parásito directamente del insecto vector (vectorial) o de la sangre o los tejidos (no vectorial). La transmisión vectorial ocurre en áreas endémicas a través de la contaminación con heces de insectos o picaduras de áreas expuestas de piel erosionada o superficies mucosas, típicamente frotando la piel o el ojo después de una picadura nocturna inadvertida o defecación en o cerca de la conjuntiva. La transmisión oral también es posible a través de la contaminación de alimentos o bebidas por las heces del vector y puede causar brotes. Las vías de transmisión no vectoriales incluyen la madre-feto, a través de transfusiones de sangre, órganos sólidos o trasplante de médula ósea.

La transmisión materno-fetal (congénita) se refiere a la transmisión durante el embarazo y el parto, y ocurre principalmente por vía transplacentaria después del primer trimestre y perinatalmente por contacto con sangre infectada de la madre. La transmisión vertical es un concepto teórico más amplio que también incluye la transmisión pos-natal y se refiere a la perpetuación transgeneracional de la infección a través de mujeres asintomáticas en edad fértil, crónicamente infectadas y no diagnosticadas que pueden transmitir la infección con cada embarazo. La transmisión es similar para los bebés nacidos por vía vaginal y por cesárea, lo que sugiere que la mayoría de la transmisión ocurre antes del parto. Una mujer crónicamente infectada puede potencialmente transmitir el parásito con cada embarazo. El tratamiento de las mujeres antes o entre embarazos reduce, pero no elimina, el riesgo de transmisión......

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Cordiales saludos. 
Ciudada de Buenos Aires. R. Argentina

982- Toxoplasmosis congénita

Lina Bollani, Cinzia, Cristian Achille,  Francesca Garofoli,  Domenico Umberto De Rose,  Valeria Meroni, Guglielmo Salvatori,  Chryssoula Tzialla. Toxoplasmosis congénita: el estado del arte. Front Pediatr. 2022; 10: 894573. Neonatal Intensive Care Unit, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy

Resumen

La infección por el parásito protozoario Toxoplasma gondii ocurre en todo el mundo y generalmente no causa síntomas. Sin embargo, una infección primaria de mujeres embarazadas puede infectar al feto por transmisión transplacentaria. El riesgo de transmisión de madre a hijo depende de la semana de embarazo en el momento de la infección materna: es bajo en el primer trimestre, puede llegar al 90% en los últimos días del embarazo. Sin embargo, a la inversa, la enfermedad fetal es más grave cuando la infección ocurre al principio del embarazo que más tarde. Las pruebas serológicas sistemáticas en mujeres embarazadas que no tienen anticuerpos al comienzo del embarazo pueden revelar con precisión una infección materna activa. Por lo tanto, se debe evaluar el riesgo de infección fetal y se debe iniciar el tratamiento preventivo con espiramicina lo antes posible para reducir el riesgo de transmisión de madre a hijo y la gravedad de la infección fetal. Cuando se confirma la infección materna, se recomienda diagnóstico prenatal con PCR en líquido amniótico. Si la infección fetal es segura, el tratamiento materno se cambia a una combinación de pirimetamina-sulfonamida y ácido folínico. Los recién nacidos con infección congénita suelen ser asintomáticos al nacer, pero corren el riesgo de sufrir secuelas tardías, como ceguera. Cuando la infección congénita es evidente, la enfermedad incluye retinocoroiditis, calcificaciones cerebrales, hidrocefalia, deterioro neurocognitivo. 

Introducción

La toxoplasmosis es una enfermedad sistémica y cosmopolita que afecta aproximadamente a un tercio de la población mundial. El agente causal es Toxoplasma gondii , un parásito protozoario intracelular obligado, cuya replicación se produce en el intestino de gatos y otros felinos, únicos huéspedes definitivos. Los animales de sangre caliente y los humanos son huéspedes intermediarios.

Se han identificado diferentes cepas, tres principales denominadas tipo I, II y III y otras atípicas, que difieren en virulencia y patrón epidemiológico de aparición. En Europa, el 95 % de los T. gondii que infectan a humanos son del tipo II, mientras que en América del Norte el tipo II representa el 43,9 %, el tipo III el 18,2 % y las cepas atípicas el resto. Un estudio reciente sobre análisis genéticos de cepas atípicas reveló que un cuarto linaje clonal (linaje tipo 12) es la cepa dominante en la vida silvestre de América del Norte y representa el 46,7% de las cepas aisladas. El genotipo del parásito puede desempeñar un papel en la determinación de la gravedad de la enfermedad: en América del Sur las cepas muestran una mayor variabilidad genética y suelen ser mucho más virulentas.

La infección se adquiere principalmente por la ingestión de carne cruda o poco cocida que contenga quistes aún viables, por la ingestión de agua, frutas, verduras, mariscos, o por contacto con tierra contaminada por ooquistes excretados en las heces de gatos infectados (Figura 1). El T. gondii también puede transmitirse a través de la sangre o los leucocitos de donantes inmunocompetentes e inmunocomprometidos. El parásito persiste de por vida en forma de quistes en el huésped intermedio.

Con pocas excepciones, la fase aguda en el adulto inmunocompetente suele ser una enfermedad subclínica o benigna. En una minoría puede haber malestar general, febrícula y linfadenopatía y coriorretinitis. La infección primaria induce la producción de anticuerpos específicos e inmunidad de por vida, pero la toxoplasmosis puede reactivarse en individuos inmunocomprometidos (p. ej., SIDA o tratamiento con corticosteroides).

En humanos, la seroprevalencia de anticuerpos contra T. gondii aumenta con la edad y varía considerablemente según la ubicación geográfica, la educación para la salud, la higiene, los hábitos alimentarios y las condiciones climáticas, disminuyó en la última década debido a una mayor ingesta de carne congelada, mejor higiene, urbanización progresiva.

En Europa la seroprevalencia de IgG oscila entre el 30 y el 50%, y en Estados Unidos ronda el 9,1% de las mujeres en edad fértil. En América del Sur, la prevalencia varía de 30 a 80%, alcanzando 100% en los grupos etarios más avanzados de las poblaciones más pobres. La prevalencia mundial general de infección aguda en mujeres embarazadas es del 1,1 %, pero es mayor en la región del Mediterráneo oriental que en la región europea. La seroprevalencia global de IgM e IgG en mujeres embarazadas es de 1,9 y 32,9%, respectivamente, con diferencias estadísticamente significativas entre las regiones de la OMS.

La toxoplasmosis congénita ocurre cuando la infección materna se adquiere por primera vez en el embarazo. Durante la fase de parasitemia, el T. gondii puede atravesar la placenta e ingresar a la circulación fetal con un riesgo de infección fetal que aumenta con la edad gestacional: esto resulta en una infección congénita que afecta al 25-30% de las mujeres tratadas durante el embarazo. A las 6, 18 y 30 semanas de embarazo, el riesgo de infección fetal es de 2,2, 23 y 56 %, respectivamente.

La incidencia de infección aguda entre mujeres embarazadas seronegativas para T. gondii varía según la ubicación geográfica; se estima que en Austria, Suecia, Francia y los Estados Unidos es de 0,8, 0,5, 2,1 y 0,2 por 1000, respectivamente. Se estima que la tasa de incidencia mundial de infección congénita es de 1,5 casos/1000 nacidos vivos con cargas más altas en América del Sur, en algunos países del Medio Oriente y países de bajos ingresos y cargas más bajas en los países europeos. En particular, la incidencia de toxoplasmosis congénita es de 1,0/10 000 en Austria, 0,5/10 000 en Estados Unidos y 2,9/10 000 nacidos vivos en Francia .........

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Dr. Anibal E. Bagnarelli,

Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Cordiales saludos. 

981- Primer "pangenoma" humano (HPRC)

El primer 'pangenoma' humano pretende catalogar la diversidad genética. Nature News Article, 10 May 2023. Layal Liverpool, Editor

Los investigadores publican los resultados preliminares de un esfuerzo en curso para capturar la totalidad de la variación genética humana.

Más de 20 años después de que se publicara el primer borrador del genoma del histórico Proyecto Genoma Humano, los investigadores publicaron un borrador del "pangenoma" humano: una instantánea de lo que está a punto de convertirse en una nueva referencia para la investigación genética que captura más de la diversidad humana de lo que hasta ahora estuvo previamente disponible. Los genetistas dieron la bienvenida al hito, al tiempo que destacaron las consideraciones éticas clave que rodean el esfuerzo por hacer que la investigación del genoma sea más inclusiva.

“Esto es como pasar de la televisión en blanco y negro a 1080p”, dice Keolu Fox, científico del genoma de la Universidad de California en San Diego. “Es algo que todos estábamos esperando”, dice Aimé Lumaka, genetista que ocupa un cargo conjunto en la Universidad de Lieja en Bélgica y la Universidad de Kinshasa en la República Democrática del Congo dice “Al genoma de referencia actual le falta no solo parte de la información genómica sino, lo que es más importante, le falta diversidad”.

El borrador del genoma, publicado en Nature el 10 de mayo , fue producido por el Human Pangenome Reference Consortium (HPRC). Lanzado en 2019, el proyecto internacional tiene como objetivo mapear la totalidad de la variación genética humana, para crear una referencia integral contra la cual los genetistas podrán comparar otras secuencias. Tal referencia ayudaría a los estudios que investigan los posibles vínculos entre los genes y la enfermedad.

El borrador del pangenoma sigue a la publicación en 2022 de la primera secuencia completa del genoma humano, que llenó los vacíos que había dejado el Proyecto Genoma Humano original. Pero a diferencia del borrador original del genoma humano y su sucesor, los cuales se derivaron principalmente del ADN de una sola persona, el borrador del pangenoma representa una colección de secuencias de una selección diversa de 47 personas de todo el mundo, incluidas personas de África, las Américas, Asia y Europa.

Mapa del tubo genético

Eimear Kenny, genetista de la Escuela de Medicina Icahn en Mount Sinai en la ciudad de Nueva York, y sus colegas alinearon todas estas secuencias computacionalmente para formar un 'gráfico de pangenoma', conceptualmente similar a un mapa del metro de Londres, en el que las rutas de ramificación indican variación genética. Los investigadores descubrieron que el pangenoma les permitió identificar el doble de variantes estructurales (grandes alteraciones genómicas, como duplicaciones o eliminaciones de genes) por persona de lo que es posible utilizando el genoma de referencia lineal original. El equipo tiene como objetivo analizar secuencias de 350 personas para mediados de 2024.

Muchas de las muestras que se analizan son de personas que participaron en el Proyecto 1000 Genomas, un esfuerzo de secuenciación iniciado en 2008 para mapear la variación genética en 26 poblaciones diversas. El consorcio Pangenome está descongelando y volviendo a analizar las muestras de ADN congeladas de los participantes utilizando una técnica más detallada llamada "secuenciación de lectura larga". Este método  analiza simultáneamente secciones más largas de ADN, en comparación con métodos de secuenciación más antiguos y puede distinguir entre pares de cromosomas de la misma persona. “Es un enfoque de resolución mucho más alta”, dice Fox. ........

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Referencia original

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Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina

980- ¿Origen del Covid-19?

Lawrence O. Gostin, J.D., Gigi K. Gronvall,. Perspective. Los orígenes del Covid-19: por qué es importante (y por qué no). NEJM  June 7, 2023. O’Neill Institute for National and Global Health Law, Georgetown University Law Center, Washington, DC (L.O.G.); Johns Hopkins Center for Health Security, Baltimore (G.K.G.).

Cuando surgen emergencias de salud, los científicos buscan descubrir la causa, por ejemplo, cómo surgió y se propagó un patógeno, porque este conocimiento puede mejorar nuestra comprensión de los riesgos y las estrategias de prevención, preparación y mitigación. Sin embargo, ha pesar de haber transcurrido el cuarto año de la pandemia de Covid-19, aún continúan los intensos debates políticos y científicos sobre sus orígenes. 

Las dos hipótesis principales son: un derrame zoonótico natural, que probablemente ocurrió en el mercado mayorista de mariscos de Huanan, y una fuga del laboratorio del Instituto de Virología de Wuhan (WIV). Vale la pena examinar los esfuerzos para descubrir los orígenes del SARS-CoV-2, los obstáculos políticos y lo que nos dice la evidencia. Esta evidencia puede ayudar a aclarar el camino evolutivo del virus. Pero en forma independiente los orígenes del virus,

La historia de los orígenes se remonta al 31 de diciembre de 2019, cuando la Organización Mundial de la Salud (OMS) se enteró de un grupo de casos de neumonía de causa desconocida en Wuhan (ver la cronología ). Las autoridades de Wuhan cerraron el mercado de Huanan al día siguiente, lo que hizo que los animales vivos no estuvieran disponibles para las pruebas. 

China compartió públicamente la secuencia genética del SARS-CoV-2 el 10 de enero de 2020. No fue sino hasta semanas después de que la OMS declarara al Covid-19 una emergencia de salud pública de importancia internacional el 30 de enero, que la Misión Conjunta OMS-China visitó Beijing y Wuhan (16 de febrero al 24 de febrero).

El informe técnico conjunto de la OMS y China publicado en marzo de 2021 calificó un derrame zoonótico del virus como una fuente "de probable a muy probable", a los productos de la cadena de alimentos fríos como "posible" y un incidente de laboratorio (WIV) como "extremadamente improbable". 

El director general de la OMS repudió de inmediato los hallazgos del informe, creyendo que era prematuro descartar un posible incidente de laboratorio. Una carta abierta publicada en Science el 14 de mayo de 2021 acreditó la teoría del laboratorio y pidió acceso abierto a los registros de laboratorio y estudios basados ​​en la ciencia. El 13 de octubre de 2021, el director general de la OMS estableció el Grupo Asesor Científico para los Orígenes de Nuevos Patógenos (SAGO). China rechazó oficialmente el plan de la OMS para una segunda fase de investigación de sus orígenes. El informe preliminar de SAGO advirtió que China estaba ocultando datos clave.

Recientemente, un equipo de expertos internacionales anunció que había identificado datos sobre muestras ambientales positivas para SARS-CoV-2 recolectadas del mercado de Huanan en enero de 2020, que China había ocultado del dominio público durante 3 años. Los científicos chinos cargaron los datos en GISAID (la Iniciativa global para compartir todos los datos sobre la influenza), pero luego los eliminaron. En respuesta a la presión de la OMS, China restauró esos datos a la GISAID.

Determinar los orígenes del SARS-CoV-2 debería ser estrictamente un asunto científico, pero se ha enredado en la política. En marzo de 2020, el Ministerio de Relaciones Exteriores de China alegó, sin pruebas, que el personal del Ejército de los EE. UU. había introducido el SARS-CoV-2 durante una visita a Wuhan, lo que llevó al presidente Donald Trump a afirmar que el virus se originó en el WIV. Tras acusar al director general de ponerse del lado de China, Trump notificó a las Naciones Unidas que Estados Unidos tenía la intención de retirarse de la OMS. Aunque el presidente Joe Biden luego revocó esa decisión, la controversia sobre los orígenes ha continuado. 

El 26 de mayo de 2021, Biden ordenó a las agencias de inteligencia de EE. UU. que revisaran las hipótesis de los orígenes en competencia. La Oficina del Director de Inteligencia Nacional publicó la “Evaluación desclasificada sobre los orígenes de COVID-19,3 .......

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Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina

979- El dengue en diferentes materiales biológicos

Mahathir Humaidi, Wei Ping Tien, Grace Yap, Choon Rong Chua, Lee Ching Ng Zeno Bisoffi, Academic Editor. Diagnóstico no invasivo del Dengue: el uso de saliva y orina en las diferentes etapas de la enfermedad. Diagnostics (Basel). 2021 Aug; 11(8): 1345. Environmental Health Institute, National Environment Agency, Singapore.

Resumen

El diagnóstico del dengue (DENV) depende en gran medida de los síntomas clínicos y se confirma de forma rutinaria con su detección en el laboratorio en muestras de suero de pacientes recolectadas mediante flebotomía. Esto presenta un desafío para los pacientes que no son aptos para la venopunción. Los métodos no invasivos de diagnóstico del dengue tienen el potencial de mejorar el actual algoritmo de detección del dengue. En este estudio, se recolectaron muestras de pacientes infectados con dengue entre enero y septiembre de 2012 y desde septiembre hasta diciembre de 2013 con dos configuraciones diferentes. Las muestras del Panel A (sangre, orina y saliva) se recolectaron diariamente cuando los 39 pacientes estaban hospitalizados y durante sus visitas de seguimiento, mientras que las muestras del Panel B (saliva) se recolectaron de 23 pacientes durante la etapa aguda del dengue. Usando DENV- PCR en el Panel A, desde el día 2 hasta el día 4 después del inicio de la fiebre, el suero mostró la mejor positividad general seguido de la saliva y la orina (100 % /82,1 %/ 67,9 %). Desde el día 5 hasta el día 10 después del inicio de la fiebre, el suero y la orina tuvieron una positividad similar (67,4% /61,2%), seguidos de la saliva (51,3%). Más allá del día 10 posterior al inicio de la fiebre, el DENV fue indetectable en el suero, pero la orina y la saliva mostraron un 56,8 % y un 28,6 % de positividad. El DENV en la orina fue detectable hasta 32 días después de la fiebre. Los resultados del panel B mostraron una sensibilidad general del 32,4 % -36 % (ARN/NS1) para la detección de DENV en la saliva. Nuestros resultados sugieren que el método de detección basado en la orina es útil especialmente para la detección tardía del dengue, donde el DENV no se detecta en el suero pero aún se puede detectar en la orina.

1. Introducción

El dengue es el virus transmitido por mosquitos más común del mundo, con aproximadamente tres mil millones de personas en riesgo de infección cada año. En aproximadamente 100 países, se estima que 50 millones de infecciones por año desafían la infraestructura de salud pública de los países afectados. Un diagnóstico de laboratorio preciso y rápido es esencial para que el médico distinga el dengue en fase inicial de otras enfermedades con síntomas clínicos similares. Esto permite la asignación eficiente de recursos limitados para actividades de control de vectores.

Existen dos métodos en el diagnóstico de laboratorio del dengue. i) El método directo implica la detección de DENV aislado, de antígenos virales como la proteína NS1, o la secuencia genómica a través de la PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR).  ii)  El método indirecto requiere la detección de altos niveles de anticuerpos IgM, IgG o IgA específicos del dengue. 

Actualmente, la prueba de RT-PCR,  la detección de NS1 mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) o la prueba rápida de flujo lateral son suficientes para la confirmación de la infección aguda por dengue. Los ensayos serológicos de anticuerpos IgM e IgG reactivos contra el dengue se pueden usar para mostrar si un paciente tiene una infección primaria o secundaria por dengue. 

Los kits de IgM basados ​​en ELISA, en comparación con los kits de IgM de prueba rápida, tienen sensibilidades más altas (61,5–99,0 % frente a 20,5–97,7 %) y especificidades más altas (79,9–97,8 % frente a 76,6–90,6 %). También se debe tener en cuenta que la IgM del dengue reacciona de forma cruzada con los cuatro serotipos de DENV y otros flavivirus como el virus del Nilo Occidental (WNV), el virus de la encefalitis de St. Louis (SLE), el virus de la encefalitis japonesa (JEV) y el virus de la fiebre amarilla (YFV). 

La IgG no es adecuada para el diagnóstico precoz de casos de infección primaria, ya que solo se puede detectar después de 10 días desde el inicio de la enfermedad. En la infección secundaria, sin embargo, se puede detectar un aumento rápido de IgG desde el día 4 después del inicio de la enfermedad. Se ha detectado Dengue IgA en suero de pacientes febriles entre los días 8 y 11 después del inicio de la fiebre de una infección primaria por dengue. Durante la infección secundaria, la IgA aumenta casi inmediatamente después del inicio de la fiebre.

El empleo de una técnica basada en la saliva en el diagnóstico del dengue proporciona un método fácil y no invasivo para la recolección de muestras. Poloni et al. y Mizuno et al. también pudieron detectar el genoma del virus del dengue en la saliva mediante RT-PCR en tiempo real, mientras que Ravi Banavar et al. demostró una sensibilidad y especificidad del 100% con muestras de saliva seropositivas en un kit ELISA IgG.  Vázquez et al. han demostrado que Dengue IgA e IgG, pero no IgM, pueden detectarse en la orina de pacientes con infección primaria y secundaria por dengue. 

Comparando las tasas positivas de antígeno NS1, Saito et al. detectó tasas similares en orina y suero en los días 11 a > 15 posteriores al inicio de la fiebre. En un estudio de viajeros japoneses que se infectaron con dengue en el extranjero, la tasa de positividad del genoma de DENV para muestras de orina y suero fue del 30 % y 79 %, respectivamente, entre los días 1 y 5 después del inicio de la enfermedad y entre los días 10 y 16 después del inicio de la enfermedad; la tasa de positividad correspondiente fue del 61 % (orina) y del 11 % (suero). Yingsiwaphat et al. pudieron aislar DENV vivo de la orina de pacientes con infección aguda y de pacientes 14 días después de la defervescencia. 

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978- Historia del laboratorio clínico - I

Angela Tomei Robinson. Patologia- los inicios del laboratorio clínico. Oxford-Laboratory Medicine 2021;52:e66-e82. St. John’s University College of Pharmacy and Health Sciences, Queens, NY

Resumen

El primer artículo de esta serie corresponde a la cronología histórica de la patología y el laboratotio clínico desde la antigüedad, con el desarrollo más temprano de las pruebas de laboratorio a lo largo de los siglos hasta el día de hoy. Varios desarrollos iniciales de "laboratorios"  (farmacéuticos, físicos, químicos, biológicos, forenses, microbiológicos) eran con fines de estudio experimental e investigación cientifica. Ninguno al principio estaba específicamente orientado clinicamente para análisis de diagnóstico directo para el cuidado del paciente. Ademas, los laboratorios clínicos originalmente no estarían afiliados a los hospitales. El uso de laboratorios clínicos para pruebas médicas para ayudar en la detección, diagnóstico y tratamiento de enfermedades sería una consecuencia de estos laboratorios de investigación y sera necesario algún tiempo para que la patología y el laboratorio clínico  fueran reconocidas como una especialidad establecida. Los historiadores generalmente demuestran que los laboratorios se crearon primero como salas independientes separadas de los hospitales para eventualmente formar parte de los hospitales universitarios. (Lab Med. 2023 Apr 13:lmac164. 10.1093/)

¿Qué es la patología?

En esencia, la patología es el estudio de la enfermedad con dos divisiones principales: patología anatómica (el estudio de las partes del cuerpo) y patología-bioquímica clínica (el estudio de los fluidos corporales).La primera aplicación de la patología comenzó y se basó en el desarrollo de la medicina donde la mayoría de los primeros patólogos eran médicos. Es importante seguir la historia hasta el día de hoy para arrojar algo de luz sobre cómo evolucionó el laboratorio clínico y observar que dicha historia ha sido complicada y enrevesada.

Cronología histórica del laboratorio clínico: primeras técnicas.

El laboratorio clínico comenzó con el estudio de un subproducto natural de todos los humanos que se obtenía fácilmente: la orina. Las muestras de orina pueden proporcionar información valiosa para un médico. Incluso si muchos profesionales de laboratorio actuales opinan que el análisis de orina quizás no sea el área de trabajo más popular asignada, la prueba de orina en sí misma ha sido bastante divertida y dramática desde el principio. Hace miles de años, las primeras pruebas se basaban en métodos de análisis muy diferentes y primitivos y dependían en gran medida de suposiciones en base únicamente a observaciones.

4000 a.C.: según papiros desenterrados, los "médicos" babilónicos registraban observaciones de orina en tablillas de arcilla. Las primeras evaluaciones médicas egipcias también se registraron en rollos y se consideraron avanzadas. Sin embargo, el lujo de obtener un diagnóstico de enfermedad se le asignaba únicamente a los miembros de la realeza y los ricos. Los rituales y sacrificios (es decir, dioses/ demonios) generalmente se usaban para determinar la naturaleza de la enfermedad. En cualquier caso, la atención al paciente se dejaba en gran medida al azar.

300-100 a.C.: Los antiguos médicos hindúes realizaron pruebas vertiendo orina en el suelo para observar si las hormigas se sentirían atraídas por la dulzura de la orina.

Era Clásica

400–301 a.C.: El médico griego Hipócrates (460–370 a.C.), conocido como el “Padre de la Medicina”, tuvo un impacto indeleble en la cultura griega durante la era helenística que se transmitió directamente a la medicina romana. Hipócrates fue uno de los primeros médicos en interpretar el funcionamiento del cuerpo a partir de la orina, al afirmar que ningún otro sistema de órganos del cuerpo humano proporcionaba tanta información mediante su excreción como el sistema urinario, y determinó que la orina podía utilizarse como indicador pronóstico para el examen de enfermedades. 

Utilizó los sentidos humanos como los ojos y los oídos. Por ejemplo, ver sedimentos lo correlacionaba con aumento de la fiebre y ver burbujas flotando indicaba que la enfermedad se prolongaría. Hipócrates también profesó la importancia del olfato e incluso del gusto. Su hipótesis mencionaba que la orina era un filtrado de 4 fluidos corporales (humores), cada uno procedente de una región diferente del cuerpo y que cada humor era necesario para mantener el equilibrio de la salud. Una de las primeras pruebas manuales de laboratorio realizadas fue la degustación de orina para confirmando su dulzura.

101–200 d.C: Aproximadamente 6 siglos después, Aelius (Claudius) Glenus (129–216 d.C.), conocido popularmente con el nombre de Galeno, fue un médico del Imperio Romano nacido en una rica familia griega, que amplió los ideales de Hipócrates. Considerado como quizás la figura médica más grande de la época, aclaró que la orina no era un filtrado de los 4 humores conocidos (sangre, flema, bilis amarilla-bilis negra) y propuso que la orina era un filtrado sólo de la sangre. También sugirió que la ingesta de líquidos por parte de un paciente sano era proporcional a su excresión. Los escritos de Galeno fueron extensos, y sus teorías sobre la anatomía (a través de animales vivos, porque las disecciones humanas estaban prohibidas por la ley romana) guiaron la medicina hasta la Edad Media. La aceptación indiscutible de sus puntos de vista (es decir, la sangre se crea en el hígado después de ingerir alimentos y fluye hacia el lado derecho o izquierdo del corazón) dominó el pensamiento médico durante aproximadamente 1500 años, lo que desafortunadamente no promovió nuevas investigaciones con nuevas ideas. para desafiar y permitió prolongar el pensamiento improductivo......

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977- Estándares OSHA para patógenos transmitidos por la sangre

Deanna Denault; Holly Gardner. Estándares OSHA para patógenos transmitidos por la sangre. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2023 Jan. Clarkson Ave, Potsdam, NY, USA. Saint Vincent Hospital Worcester, Massachusetts, USA.

Resumen

Los patógenos transmitidos por la sangre son microorganismos infecciosos en la sangre humana que pueden provocar enfermedades graves. Los trabajadores de la salud y el personal de apoyo tienen un mayor riesgo de exposición a estos patógenos. El Occupational Safety and Health Administration (OSHA) consiste en regulaciones diseñadas para proteger a los trabajadores de la atención médica expuestos ocupacionalmente. Esta presentación repasa los elementos del Estándar de la OSHA para patógenos transmitidos por la sangre. Destaca el papel del equipo interprofesional en la reducción o eliminación del riesgo de exposición ocupacional a materiales infecciosos en una amplia gama de enfermedades.

Objetivos:

• Identificar los patógenos comunes transmitidos por la sangre y el método de transmisión. 
• Enumerar y analizar la naturaleza y la frecuencia del contacto con la sangre y el método de exposición a las enfermedades transmitidas por la sangre.
• Describir las herramientas para proteger al personal sanitario de las infecciones transmitidas por la sangre.
• Resumir los elementos del estándar de patógenos transmitidos por la sangre.

Introducción

Los patógenos transmitidos por la sangre son microorganismos que pueden causar enfermedades potencialmente mortales y representar un riesgo grave para los trabajadores de la salud en contacto con sangre u otros fluidos, incluidos semen, secreciones vaginales, saliva y fluidos serosos (pleurales, pericárdicos, peritoneales y amnióticos) transparentes o visiblemente contaminados con sangre que pueden transmitir el patógeno y causar enfermedades infecciosas. 

En el ámbito de la atención de la salud, los patógenos transmitidos por la sangre a menudo se transmiten por lesión percutánea, pinchazos accidentales, mordeduras humanas, cortes, abrasiones o por exposición mucocutánea a los fluidos del paciente infectado. En el lugar de trabajo, la principal fuente de infecciones transmitidas por la sangre son las lesiones percutáneas causadas por agujas u otros objetos punzo-cortantes. 

Especialmente propensas a la exposición, son las profesiones médicas que involucran procedimientos invasivos frecuentes, un alto volumen de sangre y urgencia de atención, trabajadores de la salud en las unidades de cirugía, medicina de emergencia, cuidados intensivos, parto y diálisis, que son los más propensos a la exposición ocupacional. Otras ocupaciones con riesgo de exposición incluyen servicios mortuorios y funerarios, mantenimiento de hospitales y trabajadores en la eliminación de desechos.

De los 20 patógenos transmitidos por la sangre que se sabe que causan enfermedades como la malaria, la sífilis y la fiebre hemorrágica, hay tres que son los patógenos más comunes y que causan preocupación:  el virus de la hepatitis B (VHB), el virus de la hepatitis C (VHC) y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),  Estos tres virus representan la mayoría de las infecciones adquiridas en el trabajo y están asociados con morbilidad y mortalidad significativas.  Aunque la gran mayoría de las exposiciones ocupacionales no se manifiestan en forma de enfermedad, el riesgo general de transmisión depende de forma variable de varios factores, incluidos el tipo y el tamaño del inóculo, la duración de la exposición, el título del virus y la prevalencia de la infección activa en la población.

La hepatitis B es una infección viral capaz de causar una infección crónica persistente que puede conducir a una enfermedad aguda y crónica. Es un virus hepatotrópico que se transmite a través de la sangre o el semen de individuos infectados a aquellos que carecen de inmunidad. El VHB es un problema de salud mundial y un riesgo laboral bien establecido para los trabajadores de la salud. La incidencia del VHB en la población está aumentando constantemente, y la prevalencia de la infección por VHB en los trabajadores de la salud es mucho mayor que en la población general. El virus es estructuralmente estable, permaneciendo viable e infeccioso por períodos prolongados de hasta 1 semana en las superficies.  El VHB es altamente infeccioso y se transmite de manera eficiente a través de la exposición percutánea, mucosa a sangre o fluidos corporales infecciosos. El riesgo de infección percutánea por VHB varía del 6 al 30%, según la serología de la fuente. Las vacunas para prevenir el VHB están  disponibles desde 1981 y siguen siendo el pilar de la prevención de la hepatitis B. Entre las medidas de seguridad enumeradas, el Estándar de patógenos transmitidos por la sangre exige que los empleadores aseguren la disponibilidad de esta vacuna para todos los empleados en riesgo de exposición ocupacional.

La hepatitis C, otro virus hepatotrópico, es la infección transmitida por la sangre más comúnmente reportada en los Estados Unidos y un grave problema de salud pública. El VHC se transmite principalmente a través de la exposición parenteral, más comúnmente con agujas contaminadas. La prevalencia del VHC entre los trabajadores de la salud no supera la de la población general; sin embargo, existe un mayor riesgo de exposición en el ámbito de la atención de la salud. El riesgo de transmisión cuando se expone a sangre VHC positiva es del 1,8%, considerablemente más bajo que el VHB. Los tratamientos están evolucionando con el desarrollo de nuevas terapias dirigidas. Actualmente, no existe una vacuna o profilaxis posterior a la exposición (PEP) para la infección por VHC. 

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se dirige al sistema inmunitario causando el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El VIH se transmite a través del contacto directo con sangre, semen, fluidos rectales, fluidos vaginales o leche materna de una persona con una carga viral detectable. En el lugar de trabajo, la transmisión ocupacional está influenciada por varios factores, incluido el volumen de sangre, el tipo de procedimiento, el tipo de lesión o la penetración percutánea. En comparación con el VHB y el VHC, el riesgo percutáneo de transmisión del VIH es el más pequeño: estimado en alrededor del 0,3%. Si bien no existe una cura para la enfermedad, existen medicamentos antivirales que retrasan la progresión. En casos de exposición, si se toman dentro de las 72 horas, la administración de medicamentos profilácticos posteriores a la exposición (PEP) son altamente efectivos para prevenir esta patpología.

Colectivamente, los patógenos transmitidos por la sangre son una amenaza para la vida humana y siguen siendo un problema de salud pública. Se estima que cada año se producen aproximadamente tres millones de exposiciones a patógenos transmitidos por la sangre. En la mayoría de los entornos de trabajo o laboratorio, las infecciones transmitidas por la sangre a menudo se deben a pinchazos accidentales. En los Estados Unidos, se estima que hay 400.000 lesiones cortantes al año en el ámbito hospitalario.

En 1991, the Occupational Safety and Health Administration (OSHA) emitio el Bloodborne Pathogens Standarden en respuesta a una preocupación mundial. Esta norma garantiza la seguridad de los trabajadores de la salud en riesgo de exposición ocupacional. Los reglamentos prescritos a los empleadores se encuentran en el Título 29 del Código de Reglamentos Federales en 29 CFR 1910.1030. El cumplimiento estricto de estas normas y directrices reducirá el riesgo, minimizará la exposición y ayudará a prevenir la transmisión de patógenos transmitidos por la sangre.

Específicamente, la norma federal exige que los empleadores hagan lo siguiente:

• Establecer y actualizar anualmente un plan de control de exposición.
• Brindar educación y capacitación inicial y anual a los trabajadores. 
• Poner a disposición la serie de vacunas contra la hepatitis B dentro de los 10 días posteriores a la asignación del empleado.
• Implementar el uso de las precauciones universales.
• Identificar y utilizar controles de ingeniería aprobados.
• Identificar y garantizar el uso de controles de prácticas laborales. 
• Uso de etiquetas y/o señales de advertencia para comunicar peligros. 
• Proporcionar equipo de protección personal (PPE) adecuado y adecuado para los empleados.
• Establezca planes de evaluación y seguimiento posteriores a la exposición fácilmente disponibles.
• Mantener registros médicos y de capacitación de los empleados.

Dado que la mayor proporción de transmisión ocupacional de patógenos sanguíneos se debió a lesiones percutáneas, en 2000 se revisó la norma para incluir the Needlestick Safety and Prevention Act (HR.5178). Como sugiere el nombre, esta revisión impuso requisitos adicionales con mayor detalle para los empleados relacionados con objetos corto-punzantes. Específicamente, requiere que los empleadores consideren e implementen nuevas tecnologías y usen dispositivos médicos efectivos y más seguros. Al considerar tecnologías más nuevas, los empleadores deben solicitar la opinión de los empleados. Por último, los empleadores están obligados a mantener un registro de lesiones corto-punzantes. La promoción del uso de agujas seguras o dispositivos sin agujas y otras intervenciones ha resultado en una disminución significativa de las lesiones percutáneas entre los trabajadores de la salud en los hospitales de EE. UU...... 

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(*) Una vez que esta en la pagina del articulo, pulsando el botón derecho puede acceder a su  traducción al idioma español Este blog de bioquímica-clínica está destinado a bioquímicos y médicos; la información que contiene es de actualización y queda a criterio y responsabilidad de los mencionados profesionales, el uso que le den a la misma. Nueva presentación el  16 de Junio. 
Cordiales saludos. 
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina