Brooke Katzman, Nikola A. Baumann. Investigación de interferencias de inmunoensayos. Mejore sus herramientas de resolución de problemas y evite las pistas falsas. Clin Labor News April 1, 2022. Central Clinical Laboratory and Central Processing at the Mayo Clinic in Rochester, Minnesota
Aunque la mayoría de los inmunoensayos contemporáneos son extremadamente robustos y muestran una excelente sensibilidad y especificidad, todavía son susceptibles de interferencias tales como anticuerpos heterófilos o antianimales humanos, vitaminas, suplementos, medicamentos u otras sustancias que interfieren no identificadas en la muestra del paciente.
Según el tipo de inmunoensayo empleado (competitivo vs sándwich) y el mecanismo de interferencia, los resultados pueden aumentar o disminuir falsamente. Los laboratoristas clínicos y los médicos pueden sospechar interferencias cuando los resultados de las pruebas de laboratorio son inconsistentes con la presentación clínica o con otros hallazgos clínicos o de laboratorio. Es fundamental que los laboratorios tengan la capacidad de detectar y descartar la interferencia del ensayo como fuente de error.
Existen herramientas estándar que el laboratorio puede utilizar para solucionar problemas de resultados falsos. Los enfoques comunes utilizados para descartar una interferencia en el ensayo incluyen: 1) dilución en serie de la muestra para verificar la recuperación del analito tras la dilución; 2) métodos de prueba alternativos para evaluar la comparabilidad de los resultados entre métodos; y 3) kits comercialmente disponibles para pretratar muestras y eliminar posibles interferencias como anticuerpos antianimales o heterófilos o biotina.
Aunque estos enfoques son valiosos, los laboratorios deben considerar varias advertencias y limitaciones. Las estrategias para desarrollar un protocolo de investigación sólido y evitar pistas falsas o resultados engañosos se describen a continuación.
Validación de protocolos de dilución para detectar interferencias en los ensayos
La evaluación de la recuperación del analito tras la dilución de la muestra es una herramienta poderosa para las investigaciones de interferencia. Un patrón común que se observa cuando hay una sustancia que interfiere es que el analito no se recuperará tras la dilución inicial de la muestra. En diluciones posteriores, la concentración del analito, ajustada para la dilución, se estabilizará una vez que la sustancia que interfiere se diluya lo suficiente hasta una concentración en la que no afecte el ensayo. Si el analito no se recupera adecuadamente tras la dilución en serie de la muestra, se debe sospechar de una sustancia que interfiere.
Sin embargo, los laboratorios necesitan conocer la recuperación esperada en las muestras sin interferencias para interpretar correctamente los resultados. Algunos ensayos no diluyen de forma lineal o son muy sensibles a los efectos de matriz introducidos por el diluyente. El diluyente y el protocolo de dilución deben validarse en muestras de control para establecer la recuperación esperada.
Lo mejor es seguir las recomendaciones del fabricante para el diluyente cuando sea posible. También es necesario medir la concentración del analito en el diluyente, ya que algunos diluyentes pueden contener analitos medibles, lo que producirá resultados de recuperación engañosos.
En circunstancias normales, la dilución de la muestra se reserva para situaciones en las que la concentración del analito está por encima del rango de medición analítica (RMA). Sin embargo, cuando se utiliza la dilución como herramienta para investigar la interferencia, es posible que el laboratorio deba diluir las muestras con concentraciones de analito mucho más bajas. Además, las diluciones en el extremo inferior del RMA pueden presentar una recuperación deficiente. Independientemente del diluyente elegido,y el laboratorio debe validar su uso diluyendo las muestras de desecho del paciente con una concentración de analito similar a la de la muestra con sospecha de interferencia para establecer la recuperación esperada.
Métodos de pruebas alternativos para investigar posibles interferencias en el ensayo
El uso de métodos de prueba alternativos puede resultar útil, ya que los fabricantes de ensayos utilizan diferentes anticuerpos y reactivos que, por lo general, no son susceptibles a las mismas interferencias. Si se obtienen resultados significativamente diferentes, es posible que haya una sustancia que interfiera y que afecte a uno de los ensayos.
Al interpretar los resultados obtenidos con métodos alternativos al solucionar una supuesta interferencia, los laboratorios deben comprender cómo se compararían los resultados en muestras de pacientes sin interferencia presente. Por ejemplo, se debe tener en cuenta el sesgo conocido entre dos métodos. El laboratorio debe usar datos de comparación de métodos para establecer el acuerdo esperado entre los métodos y establecer criterios para las diferencias que se considerarían sugestivas de interferencia. Los resultados comparables entre los métodos son una fuerte evidencia de apoyo para descartar la interferencia.
Uso de reactivos y kits comercialmente disponibles para detectar interferencias en los ensayos
Finalmente, las muestras se pueden tratar con reactivos disponibles comercialmente para investigar el potencial de interferencia comparando los resultados obtenidos antes y después del tratamiento. Por ejemplo, se pueden utilizar tubos de bloqueo de anticuerpos heterófilos o reactivos de bloqueo específicos de interferencia de empresas como Scantibodies o Veravas, para eliminar los anticuerpos heterófilos o la biotina de la muestra del paciente.
Sin embargo, el laboratorio debe demostrar que el producto no afecta el ensayo. Los controles negativos (muestras de pacientes de desecho) deben usarse para validar los productos antes o junto con la investigación de la muestra con sospecha de interferencia. Idealmente, el laboratorio también confirmaría que el reactivo elimina la interferencia en un control positivo. Esto es factible para interferencias como la biotina, que se puede agregar a una muestra para crear un control positivo. Sin embargo, esto puede ser imposible para la interferencia de anticuerpos heterófilos animales o humanos. Una vez que el laboratorio confirma que el tratamiento de la muestra no afecta la medición del analito en las muestras de pacientes de control, el kit comercial puede ser una herramienta útil para la solución de problemas para identificar interferencias mediadas por anticuerpos o biotina.
En colaboración con sus colegas clínicos, los bioquímicos desempeñan un papel fundamental para proporcionar resultados de laboratorio de calidad e investigar resultados de pruebas cuestionables. Si bien la caja de herramientas de solución de problemas del laboratorio incluye técnicas valiosas, se deben considerar detenidamente las limitaciones que rodean a estos experimentos para interpretar adecuadamente los resultados y sacar conclusiones sobre las sustancias que interfieren. La capacidad de descartar con confianza una interferencia en el ensayo y garantizar resultados válidos es tan importante como poder detectar una interferencia en el ensayo.......
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Cordiales saludos.
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico-UBA.
Ciudad de Buenos Aires. R. Argentina
