Liufeng Yuan, Deju Xia , Qian Zhou , Wenqi Xu , Sihong Xu , Yueping Yin. Evaluación de un ensayo PCR múltiple para la detección de Treponema pallidum, HSV-1 y HSV-2. Diagn Microb and Infec Disea, 2023; 106 (3) :115958. Department of Dermatology, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, Beijing, China.
Resumen (ChatGPT)
El artículo evalúa la eficacia de un ensayo de PCR múltiple en la detección de tres patógenos de transmisión sexual: Treponema pallidum ( el agente causante de la sífilis) y el virus del herpes simple tipos 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2, respectivamente). El estudio evalúa la sensibilidad y especificidad del ensayo en comparación con los métodos de diagnóstico tradicionales, como la serología y los ensayos de PCR de un solo objetivo. Su objetivo es determinar si el ensayo de PCR múltiple puede ofrecer ventajas en términos de precisión, eficiencia y rentabilidad para la detección simultánea de estos patógenos a partir de muestras clínicas. Los hallazgos clave probablemente incluyan información sobre las métricas de rendimiento del ensayo, como la sensibilidad (capacidad de detectar verdaderos positivos) y la especificidad (capacidad de evitar falsos positivos), así como sus posibles implicaciones clínicas para mejorar las capacidades de diagnóstico en el contexto de las infecciones de transmisión sexual.
Resumen
La Multiplex PCR assay puede utilizar material clínico limitado y es más rentable y se espera que se utilice para la detección de Treponema pallidum y virus del herpes simple tipo 1 y 2 (HSV-1,2). Se utilizo una reacción en cadena de la polimerasa múltiplex TP-HSV1-HSV2 (PCR múltiple) dirigida a las regiones conservadas del gen PolA de TP y el gen UL42 de HSV1 y HSV2 para probar lesiones cutáneas de 115 pacientes sospechosos de tener infecciones por TP y HSV1/2 . Para los 3 patógenos (300 copias/m), la sensibilidad y especificidad clínica general en las muestras de secreción para TP fueron del 91,7% y 100%, para HSV1 del 100% y 98%, y para HSV2 del 89,7% y 100%, respectivamente. El método parece superior en pacientes con sospecha de infección temprana por TP pero resultados negativos en las pruebas de anticuerpos no treponémicos, y el método también es útil para el diagnóstico diferencial de nuevas lesiones cutáneas en sitios genitales, perianales y orales de pacientes con antecedentes de sífilis previa .
1 . Introducción
Se ha estimado que cada año se producen en el mundo más de 340 millones de nuevos casos de enfermedades de transmisión sexual, y que la cifra más alta se registra en los países en desarrollo. Treponema pallidum (TP), y virus del herpes simple tipo 1 y 2 (HSV-1,2) son patógenos importantes que causan enfermedades de transmisión sexual, así como úlceras genitales, perianales y orofaríngeas, y lesiones cutáneas en otras partes superficiales del cuerpo .
Las úlceras genitales son un factor de riesgo importante para la transmisión y adquisición del virus de inmunodeficiencia humana (VIH), y la identificación de patógenos de úlceras puede reducir eficazmente el riesgo de infección por VIH. Sin embargo, debido a la presentación clínica pleomórfica y a las infecciones mixtas , la identificación de diferentes patógenos según la presentación clínica no es confiable. Por lo tanto, existen importantes desafíos en las pruebas de laboratorio .
Los métodos estándar utilizados para diagnosticar la sífilis se basan principalmente en manifestaciones clínicas combinadas con pruebas serológicas; sin embargo, a pesar de su sensibilidad y especificidad potencialmente altas, estos métodos tienen limitaciones debido a la ventana de respuesta de anticuerpos y la reinfección. de sífilis. Entonces, la detección de patógenos a partir de determinadas muestras es un método directo para el diagnóstico definitivo de enfermedades infecciosas.
Los métodos de detección de TP incluyen microscopía de campo oscuro e inmunofluorescencia directa, pero dichos métodos también enfrentan problemas como complejidad técnica, baja sensibilidad y limitaciones de muestreo, lo que dificulta su aplicación clínica .
Los métodos tradicionales de detección del VHS incluyen cultivo y serología, pero los métodos de cultivo varían ampliamente según la duración y el estadio de la ulceración . Las pruebas serológicas también se ven afectadas negativamente por el período de ventana de presero-conversión temprana y la incapacidad de distinguir entre infecciones activas y latentes. En particular, la tecnología de PCR ha mejorado la velocidad y la sensibilidad del diagnóstico microbiano y ha permitido un uso más general de técnicas de muestreo mínimamente invasivas .
Cuando se utilizan varias sondas por PCR, se pueden detectar varios patógenos en un solo pocillo. En China, a pesar de que la PCR se ha adoptado ampliamente para el diagnóstico del HSV-2 y de que el método de detección de ácido nucleico para la sífilis también se ha incluido en el estándar para el diagnóstico de la sífilis, ha habido escasez de aplicaciones en la práctica clínica.
Teniendo en cuenta que la detección de ácido nucleico de un solo patógeno requiere hisopos separados y la recolección de hisopos de sífilis requiere un alto grado de sospecha clínica, junto con la transferencia de diferentes muestras a diferentes lugares, el tiempo de diagnóstico y tratamiento se retrasa hasta cierto punto y se incrementa el trabajo en el procesamiento de muestras. Para superar estos problemas y mejorar la tasa de detección de sífilis temprana, desarrollamos un método de PCR fluorescente múltiple para el diagnóstico de TP, HSV-1 y HSV-2 en diferentes tipos de lesiones cutáneas. Además, buscamos investigar el rendimiento y la aplicación clínica del método.
2 . Materiales y métodos. 2.1 . Declaración de ética y temas.
El presente estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Ditan de Beijing afiliado a la Universidad Médica Capital. Se invitó a participar en el estudio a los pacientes elegibles que visitaron el Departamento de Dermatología del Hospital Ditan de Beijing desde agosto de 2020 hasta octubre de 2021.
Para recopilar datos médicos y sociodemográficos, los pacientes fueron entrevistados con un breve cuestionario y completaron formularios de consentimiento informado . Los criterios de inclusión fueron: (1) antecedentes de contacto sexual no matrimonial o antecedentes de infección del cónyuge; (2) las siguientes lesiones iniciales o recurrentes de la piel y las membranas mucosas en los genitales, el ano, la cavidad bucal: (a) las típicas ampollas, pústulas y úlceras; y (b) prepucio circuncidado, exudado inflamado y erupción maculopapular descamativa, eczema y condiloma plano sospechoso de sífilis secundaria ; y (3) edad del paciente ≥18 años.
Criterio de exclusión: los que recibieron terapia con antibióticos sistémicos o tópicos durante 2 semanas antes de la inscripción. Todas las muestras se recolectaron utilizando hisopos flocados de nailon y se almacenaron a -20° C hasta la extracción del ADN y la amplificación por PCR en el National Institute for Food and Drug Control..
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Nueva presentación el 05 de Julio.
Cordiales saludos.
Dr. Anibal E. Bagnarelli,
Bioquímico-Farmacéutico,UBA.
Ciudad de Buenos Aires, R. Argentina
