Mario Thevis. Ampliación del horizonte de enfoques analíticos antidoping utilizando manchas de sangre seca. Oxford Acad- Clin Chem, 2021; 67 (8):1041-43. Germany Center for Preventive Doping Research, Institute of Biochemistry, German Sport University Cologne, Germany.
Editorial
Los avances en la instrumentación analítica y por lo tanto en sensibilidad y precisión han sido un gran impulso para explorar nuevas vías y estrategias en varios campos, incluidas las pruebas antidoping. Los desafíos y oportunidades en el uso de gotas de sangre seca (DBS) producidas de manera mínimamente invasiva en las pruebas de drogas deportivas se han evaluado durante más de 2 décadas, pero el potencial de DBS en el control del doping se ha reconocido solo en los últimos 10 años. Este potencial fue impulsado por necesidades específicas, limitaciones de muestreo, pruebas disponibles y las opciones recientemente introducidas para la recolección de muestras, procesamiento y sistema analítico. El espectro de analitos que se pueden determinar cualitativa y/o cuantitativamente a partir de la DBS ha crecido continuamente, al incluir analitos objetivo representativos de todas las clases de sustancias prohibidas y métodos de doping según se define en la World Anti-Doping Agency’s Prohibited List..
Dentro de este espectro, se encuentran los agentes estimulantes de la eritropoyesis y las prácticas de transfusión de sangre, que han presentado dos de los desafíos analíticos más complicados en las pruebas de drogas deportivas. Recientemente, se abrió aún más la puerta para detectar la transfusión de sangre autóloga, como lo muestran Cox et al en este número de Clinical Chemistry . Este método complementa los enfoques anteriores basados en análisis de sangre venosa o pruebas DBS de marcadores alternativos indicativos de transfusiones de sangre o eritropoyesis estimulada.
En la actualidad, los parámetros centrales del módulo hematológico del Athlete Biological Passportson, la concentración de hemoglobina y el porcentaje de reticulocitos (RET%), son medidos en muestras de sangre venosa que se recolectan, envían y analizan mediante analizadores hematológicos automatizados, bajo condiciones altamente estandarizadas y controladas. La proteína CD71, que se ha utilizado para detectar autotransfusiones de sangre, generalmente requiere citometría de flujo. Los requisitos de muestreo y transporte, además de la vida útil limitada de las muestras de sangre, crean cargas logísticas que pueden afectar negativamente la frecuencia y/o flexibilidad de las pruebas.
A este respecto, el informe de Cox et al. contribuye a la detección de prácticas de doping sanguíneo. Estos autores adoptaron 2 enfoques nuevos, el uso de DBS y la medición de 3 proteínas (CD71, ferroquelatasa [FECH] y coproporfirinógeno oxidasa [CPOX]), que reflejan diferentes etapas de maduración de los reticulocitos.
En resumen, la DBS con base celulosa y preparadas a partir de sangre capilar extraída con 2 dispositivos de recolección diferentes, se sometió a una secuencia de pasos de lavado para eliminar las proteínas solubles mientras conservaba las proteínas de la membrana diana. Posteriormente, se agregaron patrones internos de péptidos marcados con isótopos estables con extensiones escindibles con tripsina, y la tripsinización produjo péptidos proteotípicos de CD71, FECH, CPOX y banda 3, más los análogos marcados isotópicamente correspondientes, lo que permite la cuantificación de los compuestos diana mediante cromatografía líquida: ña espectrometría de masas en tándem de alta resolución/alta precisión-.
El método de prueba se optimizó y se validó ampliamente, lo que demuestra la idoneidad del ensayo para el propósito con respecto a la precisión intra e interensayo, los límites de cuantificación, la eficiencia de la digestión, los efectos de la matriz y las interferencias........
